[发明专利]一种快速检测黄牛ACTL8基因SNP的RFLP方法

权利要求书

1.一种快速检测黄牛ACTL8基因SNP的RFLP方法，其特征在于，包括以下步骤：

以黄牛血液全基因组DNA为模板，在2×Taq PCR MasterMix存在的情况下，利用1对PCR引物，在PCR条件下进行扩增，然后利用限制性内切酶对其进行酶切，再通过电泳检测即能鉴定黄牛ACTL8基因外显子区SNP。

2.根据权利要求1所述的快速检测黄牛ACTL8基因SNP的RFLP方法，其特征在于，所述的PCR扩增1对PCR引物包括：

上游引物Forward primer:5'-CCTGGCTCTTCCTGATCCTC-3'和下游引物Reverseprimer:5'-TCCTCCTTCGTCAGCCACTC-3'；

所述的PCR扩增的条件是：12.5μL反应体系包括2×Taq PCR MasterMix 6.25μL，ddH₂O4.75μL，100ng黄牛基因组血液DNA，10pmol/μL上、下游引物各0.5μL；

PCR反应程序为：95℃预变性5min；然后94℃变性30s，62.5℃复性60s，72℃延伸30s，如此进行32个循环；最后，72℃延伸10min，4℃保存。

3.根据权利要求2所述的快速检测黄牛ACTL8基因SNP的RFLP方法，其特征在于，所述的SNP位点为黄牛ACTL8基因第十外显子第138位核苷酸存在G/A碱基的多态性。

4.根据权利要求3所述的快速检测黄牛ACTL8基因SNP的RFLP方法，其特征在于，所述的限制性内切酶为MaeI；10μL MaeI酶切体系包括：1μL含BSA的10×缓冲液，0.2μL的浓度为10U/μL的MaeI限制性内切酶，5μL权利要求2中的PCR产物，3.8μL的灭菌超纯水；

酶切消化条件：37℃恒温箱中消化8～12h。

5.根据权利要求4所述的快速检测黄牛ACTL8基因SNP的RFLP方法，其特征在于，所述的电泳检测是用1.0％～3.0％琼脂糖凝胶电泳分析限制性内切酶MaeI消化PCR扩增片段，G碱基突变表现为：588bp和297bp，A突变表现为：885bp，相应地，GG型表现：588bp和297bp；GA型表现：885bp，588bp，297bp；AA型表现：885bp。