[发明专利]一种叶酸修饰的壳聚糖纳米载药复合材料的制备方法

说明书

本发明涉及一种叶酸修饰的壳聚糖纳米载药复合材料的制备方法，将叶酸FA、EDC、NHS加入到溶剂中搅拌，得到混合液并缓慢加入到CS‑g‑NIPAM的水溶液中室温避光搅拌，将得到的FA‑CS‑g‑PNIPAM溶于水中，加入DOX搅拌反应，透析，冷冻干燥，即得。本发明的载药材料具有pH敏感型释放及乳腺癌细胞靶向的特点，可以用于抗肿瘤研究，有着很好的实用价值。

技术领域

本发明属于纳米复合材料的制备领域，特别涉及一种叶酸修饰的壳聚糖纳米载药复合材料的制备方法。

背景技术

壳聚糖作为一种天然的阳离子多糖，来源广泛并且价格比较便宜、没有毒害,具有良好的生物相容性和生物可降解性等优点，可广泛应用于医药、食品还有化工等领域。但是壳聚糖也存在很多的不足，壳聚糖分子间存在氢键使得壳聚糖结晶度高，因此它不溶于一般的有机溶剂，从而大大限制了壳聚糖的应用。所以壳聚糖的改性研究应运而生，并取得了许多进展。目前，伴随着可控/活性自由基聚合在合成结构明确、分子量可控高分子方面的发展，壳聚糖的可控接枝改性也取得了十分不错的成绩。在壳聚糖分子中键合、亲水性的或具有某种特殊功能的合成高分子，可以改善壳聚糖的某些性能，提高壳聚糖的应用范围。另外，CS也被认为是具有pH敏感性质的天然聚合物。壳聚糖的接枝聚合物不仅具有壳聚糖的特点，而且具有合成聚合物的优点。由于其在药物递送系统开发中的潜力已经广泛应用于制药工业。

叶酸(FA)具有肿瘤靶向性，将FA连在壳聚糖表面，得到具有肿瘤主动靶向效果的纳米颗粒(FA-CS-g-PNIPAM)。叶酸受体(FR)在一些实体肿瘤细胞表面呈现高表达状态，如卵巢癌，肾母细胞瘤，宫颈癌，肺癌等。然而，在正常组织细胞中表达量很低甚至不表达，叶酸修饰的生物材料具有主动靶向于肿瘤组织与细胞的潜能。叶酸修饰的纳米颗粒可以通过其受体介导的细胞内吞作用的方式进入细胞。通过EDC-NHS技术将肿瘤靶向FA缀合到纳米颗粒的表面，经过FA修饰后的壳聚糖接枝聚合物在乳腺癌细胞的靶向治疗中具有良好的研究前景。

盐酸阿霉素(DOX)是肿瘤治疗的研究领域，最常用的药物模型。DOX作为一种临床上常用的抗肿瘤药物，在科学研究中经常被用于典型药物进行模拟研究。DOX的功效应用于多种疾病领域，包括肿瘤疾病，包括恶性淋巴瘤、骨及软组织肉瘤、乳腺癌、肺癌、急性白血病、头颈部肿瘤、肝癌、胃癌、食道癌等。DOX能够杀死肿瘤细胞，是由于DOX能够嵌入DNA的相邻碱基对使DNA发生错误配对，造成DNA链的裂解，从而高效阻截DNA与RNA的合成。因此，DOX属于一种周期性非特异型药物。根据其治病原理，DOX在治疗肿瘤细胞时，对于正常组织细胞也会产生较大的杀伤力。

新型药物传递系统能够实现DOX药物的可控释放，避免对正常组织造成伤害。药物可控释放，即能够在特定的肿瘤区域大量，快速地释放，而在正常组织区域不释放或者少量释放。研究中为了实现可控释放，最常用的方法是在药物外包裹聚合物，该聚合物能够在特定条件下降解或者分散，使包裹的药物泄露。而近年来，为了实现药物可控释放，研究者多关注于由敏感性造成释放，例如pH敏感性释放，氧化还原敏感性释放，温度敏感性释放等。

乳腺癌是威胁女性健康最常见的癌症之一。然而，它最常用化疗治疗，但其中使用的活性成分是全身分布的，导致许多副作用。化疗药物对癌细胞和健康细胞都有毒性，会引起不良反应(如脱发，肝肾衰竭等)在开发新的药物递送系统中，引起很多关注的方法是生产靶向递送的纳米级药物载体。这些具有高特异性，避免对正常组织的损害。已经开发出使用生物靶向配体的，例如肽，蛋白质，单克隆抗体，核酸适体和其他小分子，其结合肿瘤细胞表面上的作为特定生物标志物。这些主动靶向分子修饰纳米颗粒的表面，所述靶分子可以识别并特异性结合肿瘤细胞，增强纳米颗粒从细胞外空间转运到肿瘤细胞中的能力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种叶酸修饰的壳聚糖纳米载药复合材料的制备方法，克服了现有技术特异性差，靶向能力不足的缺陷，该方法操作简单、反应条件温和，壳聚糖接枝聚合物纳米颗粒粒径在200nm左右能很大程度到达乳腺癌被特定组织或细胞选择性代谢，且具有pH敏感型释放及乳腺癌靶向的特性。