[发明专利]一种用于鼠源性检测的实时荧光定量PCR试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于鼠源性检测的实时荧光定量PCR试剂盒，包括PCR反应液、酶混合液、鼠源性12S rRNA基因标准品、阴性对照品和阳性对照品。本发明通过提取待检测样品的DNA结合实时荧光定量PCR检测技术，可达到准确定量检测肉制品中鼠源性含量的目的，具有快速、灵敏、特异性好的特点，对判断肉制品中鼠源性含量具有重要意义。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，尤其涉及一种用于鼠源性检测的实时荧光定量PCR试剂盒。

背景技术

近年来，食品中肉制品的安全问题日益突出，如国内的“假牛、假羊肉事件”、“假鸭血事件”等。其中羊肉中掺杂鼠肉成为羊肉造假的一种新手段，随着人们生活水平的提高及健康意识的增强，人们越来越关心食品的真伪性，食品中动物源性成分鉴别成为社会关注的焦点之一。

过去用于肉制食品中物种的鉴别主要依赖于电泳法、免疫法、ELISA等蛋白质分析法。这些技术对于加工混合肉制品却无法分析出，而PCR技术基于其反应时间短，具有较高灵敏性、特异性成为鉴别加工食品中物种的优先选择。但传统的PCR技术在定量和大批量检测中局限性较大。因此，急于发现一种新的技术可以精确地辨别物种并实现快速、大容量的实时定量检测。实时荧光定量PCR凭借其高灵敏度和特异性，可检测熟肉以及混合样本等特点，已逐步成为肉类成分鉴别的主流技术。近年来，国内外已有利用TaqMan探针法对不同肉类种属进行鉴别的报告。

动物的线粒体DNA具有分子量小、结构保守、热稳定性好、不易降解的结构特点和母系遗传、拷贝数多、进化速度快、不发生重组的遗传特点，对线粒体DNA的序列分析所提供的信息已广泛应用于研究物种之间和物种内部的系统进化分析、动物源性成分鉴定等领域。几乎所有家畜 mtDNA 的大小约在 16.0~16.5kb 之间。

作为系统进化和种属特异性分析的对象，研究较多的线粒体DNA( mtDNA) 基因有12SrRNA 、18SrRNA 基因、tRNA-Lys 基因、ATP 酶基因、细胞色素 b（12S rRNA）基因等，D-loop 区等。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种快速、简便、灵敏、准确、可靠的用于鼠源性检测的实时荧光定量PCR试剂盒。

为解决上述问题，本发明所述的一种用于鼠源性检测的实时荧光定量PCR试剂盒，包括

—PCR反应液，由12mM Tris-HCl（pH8.9）、100mM KCl、0.12%Triton X-100、0.12% 胆酸钠、0.6 mg/mL BSA、1.8mM MgCl₂、50nM dNTP、500nM 上游引物、500nM 下游引物、300nMTaqman探针组成；

其中上游引物序列为5'- CGGTGTAAAATCCCTTAAAC-3'；下游引物序列为5'-ATATAGGCTGAATTAGCAA-3'；探针序列为5’- ATAAATAAATAAATAGAA-3’；

—酶混合液，由5U/µL Taq DNA聚合酶，50%甘油，20mM Tris-HCl (pH8.0, 25℃)，100mM KCl，0.1mM EDTA，1mM DTT，0.5% Tween^®20和0.5% NP-40组成；

—鼠源性12S rRNA基因标准品，由1.00×10⁸copies/ml、1.00×10⁷copies/ml、1.00×10⁶copies/ml、1.00×10⁵copies/ml的重组质粒组成；