[发明专利]一种用于兔源性检测的实时荧光定量PCR试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于兔源性检测的实时荧光定量PCR试剂盒，包括PCR反应液、酶混合液、兔源性NADH6基因标准品、阴性对照品和阳性对照品。本发明通过提取待检测样品的DNA结合实时荧光定量PCR检测技术，可达到准确定量待测肉制品中兔源性含量的目的，具有快速、灵敏、特异性好的特点，对判断肉制品中兔源性含量具有重要意义。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，尤其涉及一种用于兔源性检测的实时荧光定量PCR试剂盒。

背景技术

近些年，出现很多关于肉制品造假的新闻，肉制品的肉源已经引起大众的关注。比如给猪肉涂上牛肉膏冒充牛肉，劣质鸭肉冒充肥羊肉，甚至有些不法商贩用劣质猫狗肉冒充羊肉制成羊肉串等等。生活中关于肉制品的质量问题已经成为人们的心头大患。肉制品的肉质来源成分的检测涉及到很多行业，比如肉制品的进出口贸易，国内肉制品加工工业、餐饮业等等，范围非常广泛。目前，对肉制品动物源中兔源成分的检验亟需非常关键的检测技术。

过去用于肉制食品中物种的鉴别主要依赖于电泳法、免疫法、ELISA等蛋白质分析法。这些技术对于加工混合肉制品却无法分析出，而PCR技术基于其反应时间短，具有较高灵敏性、特异性成为鉴别加工食品中物种的优先选择。但传统的PCR技术在定量和大批量检测中局限性较大。因此，急于发现一种新的技术可以精确地辨别物种并实现快速、大容量的实时定量检测。实时荧光定量PCR凭借其高灵敏度和特异性，可检测熟肉以及混合样本等特点，已逐步成为肉类成分鉴别的主流技术。近年来，国内外已有利用TaqMan探针法对不同肉类种属进行鉴别的报告。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种快速、灵敏、特异性好的用于兔源性检测的实时荧光定量PCR试剂盒。

为解决上述问题，本发明所述的一种用于兔源性检测的实时荧光定量PCR试剂盒，包括

—PCR反应液，由12mM Tris-HCl（pH8.9）、100mM KCl、0.12%Triton X-100、0.12% 胆酸钠、0.6 mg/mL BSA、1.8mM MgCl₂、50nM dNTP、500nM 上游引物、500nM 下游引物、300nMTaqman探针组成；

其中上游引物序列为5'- CGAGTAATCTCAATAACAA-3'；下游引物序列为5'-TTGTTGGGTTTTCTTCTAA-3'；探针序列为5’-CCCCTAAAACGAATATACC-3’；

—酶混合液，由5U/µL Taq DNA聚合酶，50%甘油，20mM Tris-HCl (pH8.0, 25℃)，100mM KCl，0.1mM EDTA，1mM DTT，0.5% Tween^®20和0.5% NP-40组成；

—兔源性NADH6基因标准品，由1.00×10⁷copies/ml、1.00×10⁶copies/ml、1.00×10⁵copies/ml、1.00×10⁴copies/ml的重组质粒组成；

其中NADH6基因标准品序列为5’-CCAAACCTACCTCTATTAACACCCCTAAAACGAATATACCCAAAATCATAACATTCGATCCTCAAGTCTCAGGATACTCCTCAGTTGCCATCGCAG-3’；

—阴性对照品，由水组成；

—阳性对照品，由1.00×10⁷copies/ml的重组质粒组成。

所述探针中5’端标记的荧光报告基团为FAM，3’端标记的荧光淬灭基团为TAMRA。

本发明与现有技术相比具有以下优点：