[发明专利]一种药用植物白云参的组织培养方法

说明书

本发明公开了一种药用植物白云参的组织培养方法，主要包括以下步骤：(1)外植体的选择、(2)丛生芽诱导、(3)丛生芽增殖、(4)生根诱导等步骤，本发明成功建立了白云参的无性繁殖体系，为实现对白云参野生资源的保护、栽培、和对种苗的需求以及基因库的建立奠定了技术基础，解决野生白云参产量低、供应少的短缺问题。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种药用植物白云参的组织培养方法。

背景技术

白云参，又名土党参，为桔梗科金钱豹属草质缠绕藤本大花金钱豹(Campanumoeajavanica Bl.subsp.javanica)，主产于红河州和文山州大部分地区，生长在海拔400-1800米的向阳草坡或丛林中。白云参以根茎入药，味甘、微苦，性温，无毒，入肺、脾、肾三经。具有健脾胃、补肺气、祛痰止咳的功效。主治虚劳内伤、肺虚咳嗽、脾虚泄泻、乳汁不多、小儿疳积、遗尿症等，为贵州苗族习用药材。十九世纪三十年代毛灿文先生将白云参与草乌、三七、断节参等配伍，对风湿麻木、筋骨疼痛、跌打损伤、创伤流血有显著疗效。1936年正式以“七星虎力散”在云南注册出售，1958年，将“虎力散”名称进行批量生产。目前全国有11家制药企业以白云参为原料药生产相关制剂。由于长期采挖，白云参野生资源已严重不足，无法满足日益增长的生产需求。目前白云参少有人工种植，繁殖方式为种子繁殖，存在繁殖率低、生长期长等劣势，为解决白云参资源短缺问题，本实验开展了白云参组织培养技术研究，通过组培快繁大量生产组培苗以实现人工规模化种植。

发明内容

本发明的目的是提供一种白云参的组织培养方法，具繁殖周期短、繁殖率高、生长周期短(较种子繁殖少一年种植周期)等优势，适合大面积种植，解决白云参野生资源短缺与保护的问题。

本发明所采用的技术方案是，一种白云参的组织培养方法，按照以下步骤进行：

(1)选择外植体：选择白云参带芽茎段为外植体，用洗洁精稀释液清洗茎段并在自来水下冲洗干净；

(2)消毒灭菌：将茎段转至超净工作台上，放入无菌瓶中，加入75％酒精消毒5-8s，无菌水洗1次，加入饱和漂白粉溶液消毒10-15min，无菌水洗2次，再用0.05％升汞溶液消毒7-10min，无菌水洗6次；

(3)丛生芽诱导：将消毒好的茎段放在无菌吸水纸上吸干表面水分，剪去茎段切口处褐化部分，接种至初代诱导培养基中培养，诱导丛生芽；所述初代诱导培养基为：WPM/MS+ZT 0.5-1.0mg/L+2,4-D0.05-0.1mg/L+糖25-30g/L+琼脂4.5-5g/L，PH为5.8-6.0；

(4)丛生芽增殖：将步骤(3)诱导出的嫩芽剪下，剪成1-2芽/段的大小，接种至增殖培养基中培养，诱导丛生芽增殖；所述增殖培养基为：WPM/MS+ZT 0.5-1.0mg/L+2,4-D0.03-0.05mg/L+糖25-30g/L+琼脂4.5-5g/L，PH为5.8-6.0；

(5)壮苗生根：将步骤(4)诱导的丛生芽切下，接种至生根培养基中培养；所述生根培养基为：1/2WPM或1/2MS+NAA 0.5-1.0mg/L+IBA 0.1-0.2mg/L+活性炭0.4-0.6g/L+土豆30-50g/L+糖25-30g/L+琼脂4.5-5g/L，PH为5.8-6.0；

上述方法中，步骤(3)、(4)、(5)所用培养基都经过高温湿热灭菌，121℃/25min。

上述方法中，步骤(3)、(4)、(5)所用培养条件均为：温度25±2℃，空气相对湿度50％-60％，光照强度2000Lx，光照时间12小时/天。