[发明专利]同时测定16种胆汁酸的串联质谱检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种同时测定16种胆汁酸的串联质谱检测试剂盒，包括：标准品、质控品、内标品、沉淀剂、稀释剂和流动相；所述的沉淀剂为甲醇、乙醇和乙腈中的至少一种；所述的稀释剂由水、甲醇、乙醇和乙腈组成；水、甲醇、乙醇和乙腈的体积比为1～50∶0～90∶0～50∶0～50，其中甲醇、乙醇和乙腈不同时为0；所述的流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为甲酸铵或乙酸铵‑甲酸或乙酸的水溶液，所述流动相B为甲醇和/或乙腈。本发明还公开了所述串联质谱检测试剂盒的应用。本发明的串联质谱检测试剂盒具有灵敏度高、特异性好等特点，可准确、简便、快速地同时测定基质中16种胆汁酸，具有广阔的应用价值。

技术领域

本发明涉及临床检测领域，尤其涉及一种同时测定16种胆汁酸的串联质谱检测试剂盒及其应用。

背景技术

胆汁酸是胆固醇在肝脏降解代谢的产物，通过胆汁酸的肠肝循环，机体可有效地利用肝脏合成的有限的胆汁酸。胆汁酸按结构可分为2大类，一类为游离型胆汁酸，包括胆酸(CA)、去氧胆酸(DCA)、鹅去氧胆酸(CDCA)、熊去氧胆酸(UDCA)和石胆酸(LCA)，另一类是游离型胆汁酸与甘氨酸或牛磺酸的结合产物，分别称为甘氨结合型胆汁酸和牛磺结合型胆汁酸。

随着研究的进展，人们对胆汁酸的代谢调节及其生理功能和病理作用都有了更深入的了解。胆汁酸的浓度水平的变化，对肝胆疾病的诊断、鉴别及发病机理的研究具有重要价值。

在人体中，胆汁酸池为3～5g，肝脏合成胆汁酸的速度最大为6g/天，不到胆汁酸每天正常分泌的一半。人体通过肠肝循环，将90％～95％的胆汁酸经由门静脉重吸收入肝脏，从而有效地利用肝脏合成的有限的胆汁酸，故周围血中胆汁酸含量很低。因此，当肝脏对胆汁酸的摄取、分泌、运转功能受损及其他可引起胆汁酸代谢发生改变的疾病时，血中胆汁酸浓度会明显升高，血中胆汁酸浓度是反应肝功能损伤的敏感项目。

因为血中胆汁酸的浓度水平很低，这就要求检测方法的灵敏度很高。目前胆汁酸的检测方法有气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳法等。气相色谱法和液相色谱法需对胆汁酸按类别进行水解和衍生，使得气相色谱法和液相色谱法的检测速度不高，样品通量不大，而且灵敏度低。

公开号为CN1281983A的中国专利文献公开了一种血清总胆汁酸测定试剂，该试剂是由含有硝基四氮唑蓝、氧化型辅酶I、黄递酶、丙酮酸钠、磷酸盐的缓冲液构成的试剂I；和由含有3α-HSD、人血清白蛋白、EDTA、磷酸盐缓冲液的溶液构成的试剂II组成。该试剂采用黄递酶和硝基四氮唑蓝组合，易污染比色杯及堵塞生化分析仪管道，其测定灵敏度也偏低，受血液中还原性物质及酶类的干扰严重；且试剂为冻干粉制剂，试剂复溶后的稳定时间短，临床使用不方便。

公开号为CN1378077A的中国专利文献公开了一种总胆汁酸测定方法和测定试剂，反应原理是利用3α-HSD和硫代氧化型辅酶(Thio-NAD)特异性氧化胆汁酸，生成3-酮类固醇和还原性硫代氧化型辅酶(Thio-NADH)；在3α-HSD存在的条件下，3-酮类固醇和还原型辅酶I(NADH)又生成胆汁酸和氧化型辅酶(NAD)每一次循环比原来的反应提高一倍的灵敏度，如此往复循环，从而放大微量的胆汁酸，产生大量的水溶性非染料的硫代还原型辅酶I(Thio-NADH)，最后测定生成的Thio-NADH的吸光度变化，测得胆汁酸的含量。该发明中提供的试剂，在2-8℃开盖使用状态下，试剂稳定的时间较短；在2-8℃度密闭避光存储的过程中，试剂稳定性不理想，随着放置时间的延长，反应度会下降。

因此有必要开发一种新的具有良好稳定性和检测准确性的胆汁酸测定试剂盒。

发明内容

本发明提供了一种同时测定16种胆汁酸的串联质谱检测试剂盒，采用该试剂盒可同时测定16种胆汁酸，具有准确、简便、快速等优点。

本发明提供了如下技术方案：

一种同时测定16种胆汁酸的串联质谱检测试剂盒，包括：标准品、质控品、内标品、沉淀剂、稀释剂和流动相；