[发明专利]一种检测内皮抑素的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测内皮抑素的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其应用，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和内皮抑素标准品溶液，其中试剂R1包含电解质、促凝剂、防腐剂及缓冲液；试剂R2包含内皮抑素包被的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、防腐剂及缓冲液；标准品为含有不同浓度内皮抑素的适当缓冲液。本试剂盒灵敏度高，特异性强，准确度好，操作快速简单，可用于各种生化分析仪；本发明应用于内皮抑素的检测。

技术领域

本发明涉及一种检测内皮抑素的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其应用。

背景技术

目前国内的内皮抑素浓度的检测方法主要是酶联免疫吸附试验法，但是该方法耗时且价格昂贵。免疫比浊法主要包括透射比浊法、散射比浊法和免疫胶乳比浊法。免疫胶乳比浊法具有灵敏度高，特异性好的特点，在大型医院临床检验中得到了广泛应用。但进口试剂费用较高，增加了患者的负担。

发明内容

针对上述现有技术的不足之处，本发明解决的问题为：提供一种检测内皮抑素的胶乳增强免疫比浊试剂盒以及应用。

为解决上述问题，本发明采取的技术方案如下：

一种检测内皮抑素的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、内皮抑素标准品溶液；所述的试剂R1包含电解质、促凝剂、防腐剂、缓冲液；所述的试剂R2包含重组人内皮抑素抗体包被的胶乳颗粒、电解质、稳定剂、防腐剂、缓冲液；所述的重组人内皮抑素抗体为将合成的重组人内皮抑素免疫兔、羊、鸡再经亲和层析纯化获得的免疫球蛋白；所述重组人内皮抑素标准品溶液为含有不同浓度重组人内皮抑素标准品的缓冲液。

进一步，所述的试剂R1中所述电解质选自氯化钠、氯化镁、氯化钾，浓度为0.01％-1.5％；试剂R2中所述的电解质选自氯化钠、氯化镁、氯化钾，浓度为0.01％-0.1％。

进一步，所述的试剂R1中所述促凝剂选自浓度为2.5％的PEG6000或不同PEG的混合体。

进一步，所述的试剂R1和R2中所述的防腐剂选自叠氮钠，浓度为0.05％-0.1％。

进一步，所述的试剂R1和R2中缓冲液选自PBS缓冲液、MES缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris-Hcl缓冲液、DIPSO缓冲液或醋酸缓冲液中的一种，缓冲液浓度再20-200mM之间。

进一步，所述的试剂R2中所述的稳定剂选自EDTANa2和牛血清白蛋白，浓度为0.1％-1.0％。

进一步，所述的试剂R2中胶乳颗粒为直径范围0.05-0.20um的聚苯乙烯胶乳颗粒，试剂R2中胶乳颗粒浓度为0.1％-0.8％。

进一步，所述的胶乳颗粒为直径0.13um的聚苯乙烯胶乳颗粒，试剂R2中胶乳颗粒浓度为0.3％。

进一步，所述的试剂R2中内皮抑素抗体包被的胶乳颗粒是通过化学交联剂在交联缓冲液进行的；所述的化学交联剂为碳化二亚胺(EDAC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)；所述的交联缓冲液选自PBS缓冲液、MES缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris-Hcl缓冲液、DIPSO缓冲液或醋酸缓冲液，pH在6.0-8.0之间。

进一步，重组人内皮抑素标准品的缓冲液含有不同浓度，其中内皮抑素含量分别为0μg/mL、1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL，缓冲液为PBS缓冲液、Hepes缓冲液或Tris-HCl缓冲液中的一种或几种。

进一步，检测时试剂R1、R2分别加取225μL和75μL，样品加样量为4-12μL，或类似比例整体增减。

进一步，检测检测内皮抑素的胶乳增强免疫比浊试剂盒组成如下：

R1试剂：0.05mol/L PBS、2.5％PEG6000，0.05％NaN₃,0.015％NaCl；