[发明专利]一种2;4-二硝基甲苯毒性的检测方法

权利要求书

1.一种2,4-二硝基甲苯毒性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S10、将2,4-二硝基甲苯溶解于丙酮与曝气加热的自来水的混合液中，配制成含有不同2,4-二硝基甲苯浓度的培养液；

S20、用含有不同2,4-二硝基甲苯浓度的培养液分别饲养斑马鱼成鱼96h，进行多组急性暴露试验，记录各组斑马鱼的死亡率，判断2,4-二硝基甲苯对斑马鱼的急性毒性作用；

S30、用含有不同2,4-二硝基甲苯浓度的培养液分别饲养斑马鱼成鱼5d，进行多组亚致死暴露试验，取各组斑马鱼的肝脏和卵巢样品进行病理观察，以及测定各组斑马鱼的脂类运输相关基因表达、脂类代谢相关基因表达和氧气呼吸调节相关基因表达的变化，判断2,4-二硝基甲苯对斑马鱼的慢性毒性作用；

其中，在步骤S20中所述的急性暴露试验和步骤S30中所述的亚致死暴露试验的过程中，斑马鱼的饲养管理方法为：将斑马鱼置于具有恒温循环水系统的培养缸中饲养，所述培养缸中盛装有含有不同2,4-二硝基甲苯浓度的培养液，饲养过程中每天投喂饲养饵料，培养缸中的水温为27～29℃，水中溶氧大于5.0mg/L，pH为6.8～7.2，保持光照14h/黑暗10h的光照周期，所述饲养饵料包括热带小鱼饲料和红虫；

所述斑马鱼的脂类运输相关基因包括载脂蛋白、脂肪酸结合蛋白和微粒体转运蛋白，所述斑马鱼的脂类代谢相关基因包括过氧化物酶体增殖激活受体-γ、过氧化物酶体增物激活受体-α和酯酰辅酶A氧化酶，所述斑马鱼的氧气呼吸调节相关基因包括低氧诱导因子1α、转铁蛋白a和血红素加氧酶。

2.如权利要求1所述的2,4-二硝基甲苯毒性的检测方法，其特征在于，步骤S10包括：

将丙酮与养殖用水混合，制成丙酮储备液；

将2,4-二硝基甲苯加入丙酮储备液中，通过超声波破碎获得2,4-二硝基甲苯母液；

取2,4-二硝基甲苯母液与养殖用水混合，制成含有不同2,4-二硝基甲苯浓度的培养液；

其中，所述养殖用水为曝气加热的自来水。

3.如权利要求2所述的2,4-二硝基甲苯毒性的检测方法，其特征在于，所述超声波破碎的超声波频率为20～25kHz，超声波破碎的时间为5～8min。

4.如权利要求1所述的2,4-二硝基甲苯毒性的检测方法，其特征在于，在步骤S30中，取各组斑马鱼的肝脏和卵巢样品进行病理观察的步骤，包括：

解剖斑马鱼后，取斑马鱼的肝脏和卵巢样品，经过切片、染色后，通过显微镜观察肝脏样品中的肝脏组织损伤情况和卵巢样品中的卵巢组织损伤情况。