[发明专利]漆酶在蛋白凝胶脱色中的应用

说明书

本发明属于生物技术领域，更具体涉及漆酶在蛋白凝胶脱色中的应用。具体是将漆酶应用于蛋白凝胶电泳中常规染色后的脱色。本发明的目的是利用漆酶进行染色蛋白凝胶的脱色，环保、快速、简便，不需要有机溶剂，节约能源，降低染料废水的污染。本发明利用漆酶进行蛋白凝胶脱色，脱色快速(2小时可获得低背景的清晰蛋白条带)，操作简便(不需要沸腾或更换脱色液)且环保(不使用传统脱色液所需的有机溶剂如甲醇、乙酸，在脱色的同时实现染料降解，无废液处理问题及费用)。通过优化漆酶浓度、介体种类和浓度、脱色时间等因素，在较短时间内获得了良好的脱色效果，操作简便且绿色环保。

本申请是申请号为201510068601.0，发明名称为“漆酶在蛋白凝胶脱色中的应用”、申请日为2015年02月10日的母案申请的分案申请。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体涉及漆酶在蛋白凝胶脱色中的应用。

背景技术

漆酶(laccase,EC 1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶，广泛存在于高等植物、真菌和昆虫中，其中白腐真菌被认为是目前最高效的漆酶生产者。漆酶是一种绿色环保酶，漆酶通过氧化反应，使底物失去电子形成自由基，而失去的电子又传递给分子氧形成水。漆酶的底物范围很广，可以催化多种芳香族化合物的氧化，但是漆酶对不同染料的作用效果不同，取决于漆酶的性质和染料的结构。小分子漆酶介体，如ABTS(2,2-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)、HBT(1-hydroxybenzotriazole)、丁香醛(syringaldehyde,SYD)、乙酰丁香酮(acetosyringone,ACE)和丁香酸(syringic acid,SYA)等可以拓宽漆酶的底物范围或提高催化速度。漆酶的低底物特异性使其在废水处理、纸浆漂白、生物能源、食品加工、生物修复等领域中有着广泛而重要的应用前景。

蛋白质的聚丙烯酰胺凝电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis)是当代实验室蛋白质分析和检测最常用技术之一。电泳结束后将凝胶浸泡在染料中，随后通过溶剂洗去多余染料(“脱色”)，使蛋白条带直接显示。常采用考马斯亮蓝(CoomassieBrilliantBlue,CBB)R-250或G-250进行染色。常用的染色液和脱色液中含有甲醇、冰醋酸等有机溶剂。要获得较好的脱色效果，需要较长脱色时间(过夜)，并更换多次脱色液，会产生大量的(有机)染料废液，若直接排放会造成污染。到目前为止，漆酶对染料废水脱色的研究局限于水溶液环境。本发明尝试将漆酶用于蛋白凝胶(固体)的脱色，使蛋白条带在清晰背景上显示，便于观察。

发明内容

本发明提供了一种漆酶在蛋白凝胶脱色中的应用，利用漆酶进行染色蛋白凝胶的脱色，环保、快速、简便，不需要有机溶剂，节约能源，降低染料废水的污染。

本发明的漆酶在蛋白凝胶脱色中的应用，将漆酶应用于蛋白凝胶电泳中常规染色后的脱色，并在脱色的同时实现染料的降解。

漆酶的应用方式包括漆酶或漆酶/介体系统。

所述蛋白凝胶电泳包括，但不局限于十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。

所述蛋白染料包括，但不局限于考马斯亮蓝R250和G250。

所述漆酶包括，但不局限于真菌、细菌来源漆酶。

所述介体包括，但不局限于ABTS、HBT、ACE、SYA、SYD。

本发明的技术方案详述如下：