[发明专利]多取代吡咯烷衍生物及其作为Rho激酶抑制剂在癌症中的应用

说明书

本发明公开了一种多取代吡咯烷衍生物，结构如式Ⅰ所示：其中：R₁、R₂、R₃、R₄各自独立的选自‑H、‑F或‑OCH₃。本发明通过ROCK I的酶抑制活性实验和癌细胞体外抑制实验证实式Ⅰ所示的化合物具有ROCK I的抑制活性，具有多种癌细胞的抑制活性，有机会成为治疗癌症的化学药物注册分类中的一类新药。

技术领域

本发明涉及一种多取代吡咯烷衍生物及其作为Rho激酶抑制剂在癌症中的应用。

背景技术

Rho激酶(Rho-associated kinases,ROCK)是参与细胞有丝分裂粘附、细胞骨架调整、肌肉细胞收缩、肿瘤细胞浸润等一系列细胞生命现象的重要酶。包括ROCK I和ROCK II，前者主要存在于非神经组织如心脏、肺、骨胳肌等细胞，后者主要存在于中枢神经系统，如海马锥体神经元、大脑皮质、小脑浦肯野细胞等。

大量研究表明，Rho/ROCK信号通路参与了多种癌症疾病，比如乳腺癌、肺癌、结肠癌、肝癌、脑癌、头颈部癌、睾丸癌和膀胱癌。ROCK的异常表达会引起几种类型癌细胞的入侵和转移，在体内外模型中发现，由ROCK抑制剂引起的Rho/ROCK通路抑制可以有效地抑制肿瘤生长。K.Itoh等发现Y27632可以抑制肌动球蛋白的Rho介导的激活，也可以抑制MM1肝癌细胞的入侵活动，此外，连续给予Y27632可以减少植入到同基因小鼠腹腔内的MM1细胞的散播。S.Liu等观察到在转移性人类乳腺瘤和乳腺肿瘤细胞中，ROCK被超高表达，有趣的是，ROCK的超表达赋予局部性MCF-7乳腺癌细胞一种转移性表现。此外，由Y27632引起的ROCK抑制或以ROCK为靶向的体外细胞迁移和扩散，也可以在体内阻止细胞迁移到人类的骨骼中。RKI1447是2012年发现的一种选择性的ROCK抑制剂，在转基因鼠模型中，RKI1447表现出十分重要的抗乳腺癌的反侵略性和抗肿瘤活性。这些实验证明了ROCK抑制剂在预防肿瘤侵袭、迁移和增殖方面的治疗潜能。

目前使用的ROCK抑制剂大概分成以下几类：异喹啉类、苯并吡唑类、尿素类、氨基嘧啶类。新型ROCK抑制剂的研发进展缓慢，新型ROCK抑制剂的研发具有重要意义。

发明内容

本发明提供的化合物为在已有的抑制剂信息和ROCK的空间结构信息的基础上设计的一类新型结构类型的化合物。ROCK精细结构为A、F和D区共同形成与ATP结合的口袋结构。具体为如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、溶剂化合物，

其中：R₁、R₂、R₃、R₄各自独立的选自-H、-F或-OCH₃。

本发明还提供了所述的如式Ⅰ所示的化合物的合成方法，

1)在合适的溶剂中，向1,1,1-三氟-5-甲基己烷-2,4-二酮和(E)-(2-硝基丙-1-烯-1-基)苯的溶液中加入DBU后反应得到1,1,1-三氟-6-甲基-4-(2-硝基-1-苯基丙基)庚烷-3,5-二酮(中间体1)；

2)以乙醇为溶剂，Raney镍为催化剂在合适的压力下将中间体1进行氢化，经后续处理后得到2-甲基-1-(2-甲基-3-苯基-5-(三氟甲基)-3,4-二氢-2H-吡咯-4-基)丙-1-酮(中间体2)；

3)以THF和乙醇的混合溶液为溶剂，向中间体2中，加入氰基硼氢化钠和溴甲酚绿。反应结束后经硅胶色谱纯化得到中间体3；

4)中间体3和相应的溴取代化合物在DIPEA和乙腈的混合物在50℃下加热1小时，经后续处理后可以得到对应的吡咯烷衍生物。

进一步地，所述步骤1)中的溶剂可以为2-丙醇，二氯甲烷，DCM，THF等，优选THF和2-丙醇的溶液。