[发明专利]一种毛新杨种苗的组织培养方法

权利要求书

1.一种毛新杨种苗的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取毛新杨外植体并进行灭菌处理，得到脱毒外植体；所述外植体为毛新杨的半木质化嫩枝，或毛新杨顶芽下2-3片的叶片；

(2)将所述脱毒外植体接种于诱导培养基中进行诱导培养，得到不定芽；所述诱导培养基是以MS培养基为基础，并添加6-BA、IBA、蔗糖和琼脂得到，所述诱导培养基中6-BA的浓度为0.3mg/L，IBA的浓度为0.2mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为6g/L，且所述诱导培养基的pH值为5.8～6.0；

(3)将所述不定芽接种于继代培养基中进行继代培养，得到继代苗；所述继代培养基是以MS培养基为基础，并添加6-BA、IBA、蔗糖和琼脂得到，所述继代培养基中6-BA的浓度为0.2mg/L，IBA的浓度为0.1mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为6g/L，且所述继代培养基的pH值为5.8～6.0；

(4)将所述继代苗接种于生根培养基中进行生根培养，得到生根苗；所述生根培养基是以1/2MS培养基为基础，并添加NAA、IBA、蔗糖和琼脂得到，所述生根培养基中NAA的浓度为0.1mg/L，IBA的浓度为0.1mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为6g/L，且所述生根培养基的pH值为5.8～6.0。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述灭菌处理为将所述外植体依次使用酒精溶液和升汞溶液浸泡后，然后用无菌水冲洗；所述酒精溶液的体积分数为75％，所述升汞溶液的质量浓度为0.2％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述诱导培养为将所述脱毒外植体接种于诱导培养基中，在温度为25±1℃、光照强度为1800～2200Lx、光照时间为12～16h/天的条件下进行培养15～25天，直至生成不定芽。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述继代培养为将所述不定芽接种于继代培养基中，在温度为25±1℃、光照强度为1800～2200Lx、光照时间为12～16h/天的条件下进行培养，每隔20～25天进行一次继代培养，每次继代培养更换培养基，并对不定芽进行分化，直至得到继代苗。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述生根培养为将所述继代苗接种于生根培养基中，在温度为25±1℃、光照强度为1800～2200Lx、光照时间为12～16h/天的条件下，培养20～30天，得到生根苗。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)结束后，还包括步骤(5)：将所述生根苗连同生根培养基置于温室大棚的苗床上，在自然光下培育7～10天，然后将生根苗洗净后，在基质中培养30～40天得到移栽苗。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述基质中草炭、蛭石、珍珠岩的体积比为3：2：1。