[发明专利]一组同时检测ERCC4和XRCC1基因多态性的引物及应用

说明书

本发明公开了一组同时检测ERCC4和XRCC1基因多态性的引物，其包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物，同时检测的位点包括ERCC4 rs1799801和XRCC1 rs25487；将引物应用在临床化疗药物选择中，与常规的对多个位点进行单独扩增相比，不仅减少了扩增程序，降低了扩增成本，同时保证了高灵敏度、准确度以及精密度，保证了该方法的可靠性；有助于医生为患者正确选择药物和治疗方案，提高癌症患者的生存率。

技术领域

本发明属于基因多态性检测领域，具体涉及一组同时检测ERCC4和XRCC1基因多态性的引物及应用。

背景技术

癌症致死率仅次于心脑血管疾病，临床治疗手段以铂类药物为基础的化疗为主；铂类药物的作用靶点是DNA，通过链间交互作用，损伤DNA，减缓肿瘤细胞的恶性增殖速率，而DNA修复能力的单核苷酸多态性影响患者的预后；核苷酸切除修复（NER），是一条多功能的和复杂的DNA损伤的切除途径，通过识别DNA损伤而启动。这个过程的主要步骤是DNA损伤位点处的双螺旋结构解螺旋，切除包含损伤的单链DNA片段，通过DNA合成修复间隙和填补剩余的单链缺口。碱基切除修复（BER）主要修复碱基或片段的氧化或还原、非堆积性化合物、甲基化作用的产物等所造成的损伤，包括由铂类药物和放射治疗引起的。本文所研究的两个基因ERCC4和XRCC1分别在核苷酸切除修复和碱基切除修复途径中发挥重要作用；有文献支撑在Ⅳ期患者中，铂类药物疗效与ERCC4基因的多态性有关，生存率与XRCC1基因的多态性相关；在我国有数据支持在251例接受以铂类为基础药物化疗的 III 期和Ⅳ期非小细胞肺癌（NSCLC）患者 XRCC1 基因第 399 位密码子的 SNP，发现增加变异型等位基因的个数可使患者总生存期明显下降，表明含有等位基因AA可导致修复能力下降，对铂类药物敏感性增强，疗效增加。因此，由于癌症患者本身以及患者个体之间异质性的存在，同一种类的肿瘤对同一化疗方案的敏感性及毒副作用反应差异很大，通过选择性对如DNA修复酶系统基因、X线修复交叉互补基因的多态性位点检查，获得化疗疗效及毒副作用的预测因子，指导今后的个体化化疗，从而提高患者总的预后及无病生存率。现今临床上通过第三方检验公司协助，利用单基因测序的方法分别对这些位点的多态性进行检测；缺少一种特异性好、灵敏度高，准确度性好、可实现多个位点同时检测的技术和方法。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种同时检测ERCC4和XRCC1基因多态性的引物，即针对临床癌症治疗中铂类药物为基础的放化疗药物在核苷酸切除修复途径和碱基切除修复途径中的2个关键基因：ERCC4、XRCC1，2个多态性位点：ERCC4 rs1799801、XRCC1 rs25487；利用SNaPshot法同时对2个基因的2个位点进行检测；同时检测ERCC4和XRCC1基因多态性的引物包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；

针对ERCC4 rs1799801 PCR扩增的正向引物如SEQ ID NO：1所示，反向引物如SEQ IDNO：2所示，SNaPshot PCR引物如SEQ ID NO：5所示；

针对XRCC1 rs25487PCR扩增的正向引物如SEQ ID NO：3所示，反向引物如SEQ ID NO：4所示，SNaPshot PCR引物如SEQ ID NO：6所示；