[发明专利]一组同时检测ERCC基因多态性的引物及其应用

说明书

本发明公开了一组同时检测ERCC基因多态性的引物，其包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；同时检测的位点包括ERCC1 rs11615、ERCC2 rs1799793、ERCC3 rs3738948；将该引物应用在化疗药物选择中，与常规的对多个位点进行单独扩增相比，不仅减少了扩增程序，降低了扩增成本，同时保证了高灵敏度、准确度以及精密度，保证了该方法的可靠性；有助于医生为患者正确选择药物和治疗方案，提高癌症患者的生存率。

技术领域

本发明属于基因多态性检测领域，具体涉及一种同时检测ERCC基因多态性的引物及其应用。

背景技术

癌症致死率仅次于心脑血管疾病，临床治疗手段以铂类药物为基础的化疗为主。铂类药物的作用靶点是DNA，通过链间交互作用，损伤DNA，减缓肿瘤细胞的恶性增殖速率。核苷酸切除修复（NER）在化疗药物作用后的损伤修复途径中发挥了重要作用。NER，是一条多功能的和复杂的DNA损伤的切除途径，通过识别DNA损伤而启动。这个过程中的主要步骤是DNA损伤位点处的双螺旋结构解螺旋，切除包含损伤的单链DNA片段，通过DNA合成修复间隙和填补剩余的单链缺口。本文所研究的三个基因ERCC1、ERCC2、ERCC3在核苷酸切除修复途径中发挥重要作用。其中ERCC1基因被认为是影响非小细胞肺癌铂类药物化疗疗效及预后的基因；ERCC2发挥解螺旋作用；有文献报道，在临床III期病人中，携带ERCC1 rs11615 TT/TC基因型的患者病情缓解率高于CC基因型；ERCC3 rs3738948 GG/GA基因型的患者病情缓解率高于AA基因型；患者放化疗的毒性与ERCC2 rs1799793的单核苷酸多态性位点有关。因此，由于癌症患者本身以及患者个体之间异质性的存在，同一种类的肿瘤对同一化疗方案的敏感性及毒副作用反应差异很大，通过选择性对如DNA修复酶系统基因多态性位点检查，获得化疗疗效及毒副作用的预测因子，指导今后的个体化治疗，从而提高患者总的预后及无病生存率。现今临床上通过第三方检验公司协助，利用单基因测序的方法分别对这些位点的多态性进行检测；缺少一种特异性好、灵敏度高，准确度性好、可实现多个位点同时检测的技术和方法。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一组同时检测ERCC基因多态性的引物，即针对临床癌症治疗中铂类药物为基础的放化疗药物在DNA修复途径中的3个关键基因ERCC1、ERCC2、ERCC3的3个多态性位点：ERCC1 rs11615、ERCC2 rs1799793、ERCC3 rs3738948，提供了同时检测ERCC1 rs11615、ERCC2 rs1799793 、ERCC3 rs3738948基因多态性的引物；引物包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；

针对ERCC1 rs11615 PCR扩增的正向引物如SEQ ID NO：1所示，反向引物如SEQ IDNO：2所示，SNaPshot PCR引物如SEQ ID NO：7所示；

针对ERCC2 rs1799793 PCR扩增的正向引物如SEQ ID NO：3所示，反向引物如SEQID NO：4所示，SNaPshot PCR引物如SEQ ID NO：8所示；

针对ERCC3 rs3738948 PCR扩增的正向引物如SEQ ID NO：5所示，反向引物如SEQID NO：6所示，SNaPshot PCR引物如SEQ ID NO：9所示。