[发明专利]一种高效肺炎链球菌嵌合裂解酶及其突变体与应用

权利要求书

1.一种高效肺炎链球菌嵌合裂解酶ClyJ，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的一种高效肺炎链球菌嵌合裂解酶ClyJ的编码基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如权利要求1所述的一种高效肺炎链球菌嵌合裂解酶ClyJ的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

（1）嵌合裂解酶ClyJ的重组表达载体的构建：将嵌合裂解酶ClyJ目的基因克隆至pET28b（+）载体，构建ClyJ的表达载体pET28b-ClyJ；

（2）表达载体pET28b-ClyJ的转化：将表达载体pET28b-ClyJ转化宿主细菌大肠杆菌BL21(DE3)，并在细菌培养基上培养该转化细菌，出现转化子后筛选出高表达菌株；

（3）ClyJ的表达纯化：挑取高表达菌株中的单菌落接种于培养基诱导培养，收集诱导后的菌体破碎、分离纯化、鉴定得到嵌合裂解酶ClyJ。

4.根据权利要求3所述的一种高效肺炎链球菌嵌合裂解酶ClyJ的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中嵌合裂解酶ClyJ目的基因包括裂解酶PlyC催化域的CHAP功能域和ACQ35_gp20的细胞壁结合域，所述ACQ35_gp20的细胞壁结合域氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

5.权利要求1所述的一种高效肺炎链球菌嵌合裂解酶ClyJ在制备动物和人体外及体内杀灭肺炎链球菌药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述肺炎链球菌嵌合裂解酶ClyJ应用于制备体内抗肺炎链球菌感染的药物。

7.权利要求1所述高效肺炎链球菌嵌合裂解酶ClyJ的突变体，其特征在于：所述突变体为ClyJ-1、ClyJ-2和ClyJ-3三种突变体，所述ClyJ-1氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述ClyJ-2氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述ClyJ-3氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，其核苷酸序列如SEQ IDNO.10所示。

8.根据权利要求7所述的突变体，其特征在于，制备方法步骤如下：

（1）嵌合裂解酶ClyJ突变体的重组表达载体的构建：以ClyJ基因为模板，PCR扩增获得全长的ClyJ-1、ClyJ-2和ClyJ-3基因；分别将ClyJ-1、ClyJ-2和ClyJ-3的目的基因克隆至pET28b（+）载体，构建表达载体pET28b-ClyJ-1、pET28b-ClyJ-2和pET28b-ClyJ-3；

（2）表达载体的转化：分别将表达载体pET28b-ClyJ-1、pET28b-ClyJ-2和pET28b-ClyJ-3转化宿主细菌大肠杆菌BL21(DE3)，并分别在细菌培养基上培养三种转化细菌，出现转化子后分别筛选出三种转化细菌的高表达菌株；

（3）嵌合裂解酶ClyJ突变体的表达纯化：挑取三种突变体的高表达菌株中对应的单菌落分别接种于培养基诱导培养，收集诱导后的菌体超声破碎，分离纯化、鉴定得到嵌合裂解酶ClyJ突变体ClyJ-1、ClyJ-2和ClyJ-3。

9.权利要求7所述的突变体在制备动物和人体外及体内杀灭肺炎链球菌药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述肺炎链球菌嵌合裂解酶ClyJ突变体ClyJ-1、ClyJ-2和ClyJ-3应用于制备体内抗肺炎链球菌感染的药物。