[发明专利]大熊猫促黄体素β亚基单克隆抗体的制备及应用

说明书

本发明公开了大熊猫促黄体素β亚基单克隆抗体的制备及应用，属于生物学技术领域，抗大熊猫LHβ亚基单克隆抗体杂交瘤细胞株14081‑1‑9，保藏编号：CCTCC NO：C2018128。本发明利用细胞融合技术，建立分泌抗LHβ亚基单克隆抗体的杂交瘤细胞株，收集并纯化细胞株培养上清，获得高特异性LHβ亚基单克隆抗体，并建立高特异性的LHβ亚基单克隆抗体应用于Western Blot蛋白检测，为LH蛋白的定位和组织表达信息，及利用LHβ亚基高特异性的单克隆抗体对LH受体的配体、拮抗物、抗拮抗物进行深入研究，为特异性配体、拮抗物、抗拮抗物的发现创造条件。同时为进一步探讨LH分泌及基因进一步调控，揭示生殖生理规律，示其在大熊猫中生殖生理规律，进一步掌握大猫发情排卵及妊娠规律提供了新的资料。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及大熊猫促黄体素β亚基单克隆抗体的制备及应用。

背景技术

促黄体素(LH)是脑垂体前叶嗜碱性细胞分泌的糖蛋白激素，受下丘脑促性激素释放激素(GnRH)的控制，同时受卵巢的正反馈和负反馈调控。目前，大量的研究表明，LH对卵泡发育成熟的完成和卵母细胞发育潜力的获得有重要作用。卵泡由一个居于核心的卵细胞及周围的颗粒细胞和卵泡膜细胞组成。卵泡形成是一个高度协调的生理过程，受多种因素调控。FSH和LH是调控卵泡生长发育的主要因素。雌激素的产生依赖LH和FSH的协同作用，最后成熟和排卵都与LH密切相关。

在人类中的研究表明：青春期前儿童促性腺激素处于低水平，青春期受下丘脑GnRH的调控，随青春发育的成熟，LH分泌逐渐增加，在生育年龄，LH的分泌随月经周期而出现周期性变化。LH在卵泡早期处于较低水平，以后逐渐上升，至排卵前24小时左右达高峰，24小时后迅速下降，黄体后期逐渐下降。就卵泡发育而言，LH作用在中、晚卵泡期，LH和方式FSH的协同作用促进卵泡发育和排卵，形成黄体并分泌孕激素。

促黄体素(LH)活性形式是糖基化的异源二聚体，由α和β两个亚基组成，β亚基决定激素的特异抗原性和特异功能，但需与α亚基结合才具有生物学活性。促黄体素，甲状腺激素，等糖蛋白激素采用了与促卵泡素相似的结构。它们共享同样的α亚基(分子量13572.9)，而β亚基则随激素的不同而不同。因此，LHβ亚基是LH唯一的特异亚基，由141氨基酸编码的蛋白，分子量为15033.88，具有活性的二聚体LH分子量约28000。

由于种属差异的原因，目前没有特异的抗大熊猫LH特异抗体。

发明内容

本发明目的是提供一种抗大熊猫LHβ亚基单克隆抗体杂交瘤细胞株、抗大熊猫LHβ亚基单克隆抗体及制备方法，解决现有技术中没有特异的抗大熊猫LH特异抗体的问题。

本发明采用的技术方案如下：

抗大熊猫LHβ亚基单克隆抗体杂交瘤细胞株14081-1-9，保藏编号：CCTCC NO:C2018128。

优选的，所述的抗大熊猫LHβ亚基单克隆抗体杂交瘤细胞株14081-1-9用于产生抗大熊猫LHβ亚基单克隆抗体。

优选的，抗大熊猫LHβ亚基单克隆抗体，由杂交瘤细胞株14081-1-9产生，亚型均为IgG1。

所述的抗大熊猫LHβ亚基单克隆抗体在western blot技术中的应用。

抗大熊猫LHβ亚基单克隆抗体的制备方法，步骤如下：

(1)设计大熊猫LHβ特异的序列如SEQ ID NO:1所示，人工合成具有SEQ ID NO:1所示序列的多肽片段，并与KLH偶联，作为增强免疫原性作为生产特异性抗体的免疫原LHβ-KLH；

(2)将步骤(1)中所述的免疫原LHβ-KLH和佐剂一起注射至小鼠腹腔免疫小鼠，多次免疫，直至血清效价达标为止；

(3)采用常规方法进行细胞融合，得到杂交瘤细胞；