[发明专利]大熊猫催乳素单克隆抗体的制备及应用

说明书

本发明公开了大熊猫催乳素(PRL)单克隆抗体的制备及应用，属于生物学技术领域，抗大熊猫PRL单克隆抗体第一杂交瘤细胞株11906‑14，保藏编号：CCTCC NO：C2018126；抗大熊猫PRL单克隆抗体第二杂交瘤细胞株11906‑5保藏编号：CCTCC NO：C2018127。本发明利用细胞融合技术，建立分泌抗大熊猫PRL单克隆抗体的杂交瘤细胞株，收集并纯化细胞株培养上清，获得高特异性PRL单克隆抗体，并建立高特异性的PRL单克隆抗体应用于Western Blot蛋白检测，为PRL蛋白的定位和组织表达信息，及利用PRL高特异性的单克隆抗体对PRL受体进行深入研究，为特异性配体、拮抗物、抗拮抗物的发现创造条件。同时为进一步探讨PRL分泌及基因调控，揭示生殖生理规律，提供了新的资料和思路。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及大熊猫催乳素单克隆抗体的制备及应用。

背景技术

催乳素(prolactin,PRL)是一种由垂体前叶腺嗜酸细胞分泌的蛋白质激素。主要作用为促进乳腺发育生长，刺激并维持泌乳，还有刺激卵泡LH受体生成等作用。

催乳素是是含229个氨基酸多肽，分子量为26236.15的蛋白质激素。在人类研究中表明，在血中还存在着较大分子的PRL，可能是PRL的前体或几个PRLA分子的聚合体是脑垂体前叶嗜碱性细胞分泌的糖蛋白激素。另外有研究表明：促乳素分子存在许多变体，已证明垂体前叶，有一种137氨基酸的促乳素变体。变体是由于促乳素基因转录物(mRNA)替换、剪切或翻译后进行蛋白酶裂解或多聚化、二聚化、磷酸化、硫化、糖基化、脱氨化等修饰形成的，经过翻译修饰可降低催乳素的活性，同时各种动物的PRL在结构存在种间差异，不同种属的动物PRL由190～200个氨基酸组成，分子量从22 000-25 000不等。哺乳动物的PRL都是单链多肽，相对分子质量为23 000-24 000。大鼠及小鼠的PRL有197个氨基酸，人、牛及猪的PRL由199个氨基酸组成。现有序列比对分析表明，不同的哺乳动物PRL的氨基酸同源序列达60％-100％，反应了PRL序列存在种属特异性。在哺乳动物，促乳素可以通过自分泌和旁分泌，作为一种细胞因子来调节乳腺发育、促进乳汁生成、发动和维持泌乳。PRL要行使功能，必须与其受体结合，通过受体作用于靶细胞，引起靶基因的表达。PRL基因和PRLR基因的突变或敲除都会引起动物的繁殖障碍。随着研究的不断深入，发现除了垂体以外，全身许多组织都能生长PRL，这正是体现PRL生物学作用多样性的原因。

目前大熊猫中催乳素的研究还存在空白。由于种属差异的原因，目前没有特异的抗大熊猫PRL特异抗体。

发明内容

本发明目的是提供一种抗大熊猫PRL单克隆抗体杂交瘤细胞株、抗大熊猫PRL单克隆抗体及制备方法，解决现有技术中没有特异的抗大熊猫PRL特异抗体的问题。

本发明采用的技术方案如下：

抗大熊猫PRL单克隆抗体第一杂交瘤细胞株11906-14，保藏编号：CCTCC NO:C2018126；抗大熊猫PRL单克隆抗体第二杂交瘤细胞株11906-5保藏编号：CCTCC NO:C2018127。

优选的，抗大熊猫PRL单克隆抗体的所述第一杂交瘤细胞株11906-14和所述第二杂交瘤细胞株11906-5均用于产生抗大熊猫PRL单克隆抗体。

优选的，抗大熊猫PRL单克隆抗体，由所述第一杂交瘤细胞株11906-14和所述第二杂交瘤细胞株11906-5产生，亚型均为IgG1。

优选的，抗大熊猫PRL单克隆抗体在western blot技术中的应用。

抗大熊猫PRL单克隆抗体的制备方法，步骤如下：

(1)设计大熊猫PRL特异的序列如SEQ ID NO:1所示，人工合成具有SEQ ID NO:1所示序列的多肽片段，并与KLH偶联，作为增强免疫原性作为生产特异性抗体的免疫原 PRL-KLH；