[发明专利]一种特异性结合高表达PDL1蛋白的细胞的核酸适配体及其应用

说明书

本发明公开了一种特异性结合高表达PDL1蛋白的细胞的核酸适配体，所述核酸适配体序列包含以下四种序列中的至少一种：A、如SEQ ID No.1所示的DNA序列；B、与SEQ ID No.1所示DNA序列具有60％以上同源性，且能够特异性结合高表达PDL1蛋白的细胞的DNA序列；C、在严格条件下与SEQ ID No.1所示DNA序列杂交的DNA序列；D、由SEQ ID No.1所示DNA序列转录的RNA序列。本发明还公开了一种核酸适配体衍生物。本发明还公开了上述核酸适配体或核酸适配体衍生物的应用。本发明能够与表达PDL1蛋白的细胞紧密结合。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种特异性结合高表达PDL1蛋白的细胞的核酸适配体及其应用。

背景技术

程序性死亡分子1(programmed death-1，PD1)及其配体(programmed deathligand，PDL)属于B7家族的共刺激分子，介导免疫反应的负性调节信号，在肿瘤发生、病毒感染以及自身免疫病中都发挥了特异性的调节作用。PDL有两种分子模式：细胞程序性死亡-配体1(Programmed cell death 1ligand 1，PDL1)和细胞程序性死亡-配体2(Programmed cell death 1ligand 1，PDL2)，PDL1组成性表达于T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞(dentric cell，DC)上，在活化后的细胞上表达量增加。除此之外，PDL1还表达于大量非淋巴细胞的组织细胞上，如心脏内皮细胞、胰腺的β细胞、胎盘的合体滋养层细胞等等。相反，PDL2的表达相对较局限，主要表达在抗原递呈细胞上，如活化的巨噬细胞、DC，所以在调节免疫方面主要是PD1/PDL1发挥作用。PDL1也称为表面抗原分化簇274(clusterof differentiation 274，CD274)或B7同源体1(B7 homolog 1，B7-H1)，由CD274基因编码，是由290个氨基酸组成的第一型跨膜蛋白。正常情形下免疫系统会对聚集在淋巴结或脾脏的外来抗原产生反应，抗原特异性的细胞毒杀性T细胞(CD8+T细胞)会增生，而PD1与PDL1结合，可以传导抑制性的信号，对活化的CD8+T细胞的进一步增殖和活化有显著的抑制作用，肿瘤细胞能借助此途径逃逸细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤作用，从而减弱机体对肿瘤细胞的免疫应答。

核酸适配体(aptamer)是指通过指数富集的配基系统进化技术(SELEX)筛选分离得到的DNA或者RNA分子，也称为化学抗体，它可以与其他靶标如蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至整个细胞进行高亲和力和特异性的结合。与传统的抗体相比，核酸适配体具有分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程。因此核酸适配体是一种非常理想的分子探针，可以特异结合到目标细胞或者蛋白表面。

免疫检查点和CAR-T细胞治疗是近年来肿瘤免疫治疗领域最引人关注的研究热点。基于PD1/PDL1在机体免疫调节中的作用，PD1与其配体PDL1介导的信号途径正成为通过免疫干预进行临床疾病治疗的手段之一。人源化PDL1抗体能够与部分肿瘤表面PDL1位点结合，阻断T细胞表面PD1与肿瘤PDL1结合，从而解除肿瘤细胞对T细胞免疫抑制作用，增强T细胞杀伤肿瘤细胞能力。基于SELEX的方法，核酸适配体用于肿瘤免疫治疗的可行性目前也被广泛研究。但是据我们所知，基于能特异性结合细胞表面PDL1蛋白的核酸适配体的应用还没有报告。因此，本领域对特异性结合细胞表面PDL1蛋白的核酸适配体存在需求。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种特异性结合高表达PDL1蛋白的细胞的核酸适配体及其应用，本发明与高表达PDL1蛋白的细胞的结合力很强，能特异性识别高表达PDL1蛋白的细胞。

本发明提出的一种特异性结合高表达PDL1蛋白的细胞的核酸适配体，所述核酸适配体序列包含以下四种序列中的至少一种：

A、如SEQ IDNo.1所示的DNA序列；