[发明专利]一种产耐酸耐高温型木聚糖酶的基因工程菌及应用

权利要求书

1.一种产耐酸耐高温型木聚糖酶的基因工程菌，所述菌株为毕赤酵母（Pichiapastoris）GS115-xyl-Mut^s-5，其保藏编号为CCTCC NO：M2018258。

2.权利要求1所述的基因工程菌的摇瓶发酵方法，包括：

将权利要求1所述基因工程菌在100 mLBMGY培养基中培养至OD₆₀₀为3.8-4.5后，转接至100mL BMMY培养基中，所述的BMMY培养基含终浓度为0.5%的吐温80，26-28℃进行诱导发酵，每10-12 h补加甲醇与山梨醇的混合液0.5 mL；所述的混合液中甲醇与山梨醇的质量比10:1。

3.权利要求1所述的基因工程菌的高密度发酵方法，包括以下步骤：

1）.菌体生长阶段

将权利要求1所述基因工程菌种子液接种至装有BSM培养基的发酵罐中，在发酵起始阶段设置转速300-350 rpm，用氨水调节pH至4.5-5.5，温度28-32℃，当BSM培养基中的甘油消耗完且DO降低后又急剧上升至100%时，进入连续补甘油阶段，设置转速450-550rpm，以恒定的速率补加含有1.2% PTM1的50%甘油；

2）.甲醇诱导表达阶段

当溶氧上升至100%后先让菌体饥饿1-1.5 h，待甘油完全耗尽，此时开始甲醇诱导，设置搅拌速度600-800 rpm，甲醇的添加量为0.8-1.2 mL/h/L；整个阶段使DO值在10%~20%之间，并保持该速率至发酵结束，所述甲醇含有1.2%的PTM1微量盐。

4.权利要求1所述的基因工程菌在制备木聚糖酶中的应用。