[发明专利]一种无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂及制备方法和应用

说明书

本发明属于检测试剂技术领域，具体涉及一种无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂及制备方法和应用。所述试剂缓冲液以及分散在缓冲液中的酪氨酸酶和4‑氨基安替比林。所述制备方法是将上述组分计量混合。可应用于制备尿液中对羟基苯丙氨酸的试剂盒。本发明提供的技术方案采用酪氨酸酶对对羟基苯丙氨酸进行定性和定量分析，并成功将其改进为可以产品的尿液检测试剂，检测试剂组分环境友好，其中不再含有汞镍等重金属离子，使用后也不会造成环境污染，另外，温和的分散体系，使得制备和使用过程非常安全。

技术领域

本发明属于检测试剂技术领域，具体涉及一种无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂及制备方法和应用。

背景技术

肿瘤的早期诊断和早期治疗是提高肿瘤治愈率的关键。现临床常用的确诊手段有胸透、B超、CT、核磁共振等，常常是伴随着穿刺、抽血等加重病人痛苦甚至有可能发生交叉感染的手段，而且价格昂贵，更重要的是通过这些手段能检测出的肿瘤一般都处于中晚期，治愈率大大降低。

癌细胞的核苷酸代谢异常会生成一种单羟酚类代谢物，其中对羟基苯丙氨酸的含量远高于正常人，而这种物质能够通过尿液排放。因此检测对羟基苯丙氨酸的含量，可以推断人体是否患有癌症，能够及早的发现肿瘤，挽救生命，无需额外的开支，免去病人的恐惧和痛苦。

目前对羟基苯丙氨酸尿液检测试剂都是采用汞离子、亚汞离子显色，比如中国专利CN103323452A、CN104535565A、CN106706614A和CN107490689A中的技术方案均是基于这一原理。该方法有以下不足：1)试剂采用氨基酸和金属离子配位原理，尿液中的尿酸等在高浓度情况下产生极大干扰，造成假阴性结果；2)检测方法中都含有汞离子，汞的毒性不仅使制备过程存在一定安全隐患，另外，检测废液中汞镍等重金属离子也会对环境产生危害，因此生产和回收都需特殊的处理，增加使用成本；3)硫酸硝酸等强酸的使用在制备过程和使用过程也同样存在很多安全问题。

发明内容

本发明提供了一种无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂及制备方法和应用，用以解决目前对羟基苯丙氨酸检测试剂中均含汞和强酸的问题。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：所述无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂，其包括缓冲液以及分散在缓冲液中的酪氨酸酶

可选地，还包括4-氨基安替比林。

酪氨酸酶，也叫多酚氧化酶、儿茶酚氧化酶等，能够将无色的多酚类物质氧化为有颜色的茶红素、茶黄素等物质。但茶红素茶黄素颜色较浅，颜色梯度不明显，如果作为尿液检索试剂则灵敏度不足，而4-氨基安替比林则可以加深显色效果，从而使酪氨酸酶作为对羟基苯丙氨酸成为可能。

可选地，还包括分散在缓冲液中的蔗糖、白蛋白和Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)。酪氨酸酶作为显色剂还存在一个贮存稳定性的问题，通过在缓冲液中添加适量的蔗糖、白蛋白和Triton X-100，则可以配置的试剂可以长期保存，解决了其产品化的问题。

可选地，所述缓冲液为磷酸盐水溶液，pH值为5.0～8.0。

可选地，所述酪氨酸酶的浓度为50～2000U/mL。

可选地，所述4-氨基安替比林的浓度为0.5-10mg/mL。

可选地，所述蔗糖的浓度为0.02-0.1g/mL、白蛋白的浓度为0.005-0.05g/mL和Triton X-100的浓度为0.005-0.02g/mL。

本发明还提供了上述无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂的制备方法，其包括如下步骤：配置缓冲液，将酪氨酸酶干粉和4-氨基安替比林溶解在所述缓冲液中，配置完成。

本发明还提供了一种尿液中对羟基苯丙氨酸的试剂盒，其包括盛装有上述无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂的安瓿瓶。

可选地，所述安瓿瓶中无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂的量为0.1-0.5mL。