[发明专利]快速检测药材中的黄曲霉毒素的方法和所用的试纸卡

说明书

本发明涉及快速检测药材中的黄曲霉毒素的方法和所用的试纸卡。该方法包括如下步骤：提供用于检测黄曲霉毒素的胶体金试纸卡；样品用乙腈溶液提取，过NH2/C18柱净化样品，过C18柱二次净化样品测定：移取样品提取液，点于胶体金试纸卡上，在45℃条件下恒温孵育，用读数仪对检测条进行读数测定，并根据上样量和样品稀释倍数计算药材中的黄曲霉毒素含量。本发明方法可以在5分钟检测出结果，这种方法可以准确定量检测各种根及根茎类中药材。本发明所提供的试纸卡具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、检测结果准确、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。此外，本发明方法回收率高、检测结果可以长时间保存。

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别是属于医药检测技术领域，涉及一种快速检测中药材中的黄曲霉毒素特别是其总量的方法，以及该方法所用的试纸卡，特别地，本发明涉及一种采用胶体金试纸卡来快速检测中药材中黄曲霉毒素的量特别是其总量的方法。本发明方法呈现优异的技术效果。

背景技术

黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。AFT 由黄曲霉菌和寄生曲霉菌等产毒菌株产生的次生代谢产物，是自然界中已发现的理化性质最稳定的一类毒素。已知的AFT有20多种，常见的有黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2，其中黄曲霉毒素B类和G类具有很强的肝毒性，尤其 B1的毒性最强，也是致癌性最强的一种物质，在1993年被世界卫生组织癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物。黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等农作物。

黄曲霉毒素不仅广泛存在于玉米、麦类、稻谷等农产品以及坚果、花生等多种食用植物中，也存在于中药等药用植物中。中药材材种类繁多，种植地区广泛，多数药材在生产、加工、贮藏、运输的过程中，很容易发生霉变而被黄曲霉毒素污染。有学者在对中药黄曲霉毒素的污染情况进行调研时发现，中药材、饮片及中成药被黄曲霉毒素污染的情况十分普遍。因其剧毒和强致癌性，且对于其污染预防研究的薄弱，黄曲霉毒素成为国内外政府和消费者监管与关注重点。针对农产品及食品，我国及世界各国就其污染问题采取控制措施，即设置严格的限量标准来保障农产品质量安全。而相较之下，对于中药中的污染控制甚为薄弱。《中国药典》(2015版)开始对远志等19种药材及其饮片品种项下增加黄曲霉毒素检查项目。药典限量为黄曲霉毒素B1不得过5μg/kg，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总量不得过10μg/kg。其他中药材及饮片均未控制尚未有标准对其黄曲霉毒素的限量进行规定。根及根茎类中药为中药中品种种类最多的一类，《中国药典》(2015年版)中根及根茎类中药占收载药材饮片数量的近1/3。其次，根及根茎类中药原植物长期接触土壤、水和腐殖质，并且含有糖类、粘液质、淀粉、蛋白质及油类等成分增加了其感染黄曲霉毒素的风险。另外如远志等饮片的特殊炮制方法，需要水中长时间浸泡等也增加了霉变感染黄曲霉毒素的可能。所以对于根及根茎类中药安全性的监管和黄曲霉毒素污染的控制势在必行。尤其是中成药建立高灵敏度的黄曲霉毒素测定方法有着迫切的需求。

目前，对黄曲霉毒素检测的方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、免疫分析法、质谱法、免疫亲和荧光法等。高效液相色谱法灵敏度高、分离能力强、特异性好等，但有些样品需要作彻底有效的前处理，不适合于大批量样品的检测，并且设备仪器昂贵，不易普及。酶联免疫吸附法是目前常使用的一种检测方法，它具有快速、灵敏、可定量、对样品纯度要求不高等优点，特别适用于大批量样品的检测，但由于需要酶标仪和操作熟练的人员以及检测时间相对较长，所以不适合现场快速检测。胶体金免疫层析法与酶联免疫法相比检测时间更短，稳定性好、操作简便、无需其他仪器设备，结果判断直观可靠，适用于进行现场快速筛选。