[发明专利]一种测定碱性磷酸酶的比率型荧光探针及其合成方法与应用

权利要求书

1.一种测定碱性磷酸酶的比率型荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的结构式为：

2.一种如权利要求1所述的测定碱性磷酸酶的比率型荧光探针的合成方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)以甲醇为反应介质，以邻氨基苯硫醇和5-甲基水杨醛为反应物，以碘单质为反应氧化剂，常温反应3～5小时至反应液呈深黄褐色，经抽滤，甲醇洗三次得到灰白色固体2-(2'-羟苯基-5'-甲基)苯并噻唑；

(2)以三氟乙酸作为反应溶剂，将步骤(1)得到的2-(2'-羟苯基-5'-甲基)苯并噻唑加入六次甲基四胺甲酰化，于100℃反应12～24小时，反应完全冷却后用氢氧化钠溶液调节pH为中性，抽滤，滤饼干燥得到甲酰化产物；

(3)向甲酰化产物中加入无水乙醇作为溶剂，再加入吡啶盐，以哌啶作为催化剂，加热回流5～6小时得到黑紫色溶液，经减压蒸馏获得黑紫色固体，纯化即得具有红色荧光的化合物；

(4)将步骤(3)得到的具有红色荧光的化合物溶于干燥的二氯甲烷中，加入三氯氧磷和三乙胺，常温反应结束后减压蒸馏得到固体物质，加冰水水解，析出固体，纯化得到所述的测定碱性磷酸酶的比率型荧光探针。

3.根据权利要求2所述的一种测定碱性磷酸酶的比率型荧光探针的合成方法，其特征在于，步骤(1)中所述碘单质、邻氨基苯硫醇、5-甲基水杨醛、甲醇的摩尔比为1：(1.5～2.5)：(1.5～2.5)：(15～20)。

4.根据权利要求2所述的一种测定碱性磷酸酶的比率型荧光探针的合成方法，其特征在于，步骤(2)中所述2-(2'-羟苯基-5'-甲基)苯并噻唑、六次甲基四胺、三氟乙酸的摩尔比为1：(2～3)：(15～30)。

5.根据权利要求2所述的一种测定碱性磷酸酶的比率型荧光探针的合成方法，其特征在于，步骤(3)中所述甲酰化产物、吡啶盐、哌啶、无水乙醇的摩尔比为1：(1.5～2.5)：(3～5)：(15～30)。

6.根据权利要求2所述的一种测定碱性磷酸酶的比率型荧光探针的合成方法，其特征在于，步骤(4)中所述具有红色荧光的化合物、三氯氧磷、三乙胺、干燥的二氯甲烷的摩尔比为1：(1.5～2.5)：(3～5)：(15～30)。

7.一种如权利要求1所述的比率型荧光探针或如权利要求2～6任一所述方法合成的比率型荧光探针在检测碱性磷酸酶中非诊断目的的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述碱性磷酸酶在人宫颈癌细胞中过度表达。