[发明专利]尿液中miR-214作为肾脏纤维化的生物标志物的用途

说明书

本发明公开了尿液中miR‑214作为肾脏纤维化的生物标志物的新用途，同时提出了一种通过检测尿液miR‑214来早期诊断和动态监测肾脏纤维化的试剂盒。研究结果表明，在慢性肾脏病患儿的尿液中检测miR‑214具有重要的临床意义，为临床判断肾脏纤维化的程度提供重要的依据，可以早期干预肾脏纤维化的进展。

技术领域

本发明涉及miR-214的新应用，具体地涉及尿液中miR-214作为肾脏纤维化的生物标志物的新用途。

背景技术

肾脏纤维化是多种慢性肾脏疾病(CKD)进展到终末期肾衰竭(ESRD)的共同病理基础，其病理生理过程主要包括：包括肾小管上皮细胞在内的肾脏固有细胞损伤与阶段、纤维形成的信号传递阶段、纤维形成阶段和肾脏损害阶段。其中，肾小管上皮细胞损伤及损伤后诱发的一系列生物化学反应是启动和推进肾小管间质纤维化的主要因素。

蛋白尿是众多慢性肾脏疾病的共同特点，包括儿童肾脏疾病。其中部分患儿在治疗后会痊愈，但仍有部分患儿存在持续的蛋白尿，而目前认为，长期大量蛋白尿总是与肾间质损害伴随出现。使用大剂量牛血清白蛋白构造大鼠白蛋白超载实验发现，在蛋白尿出现后很短时间内即出现了肾间质炎症，进而出现肾间质纤维化和肾功能损害。因此这部分持续大量蛋白尿患儿会逐渐出现肾间质纤维化，进而走向终末期肾病。目前肾脏纤维化诊断主要依赖肾穿刺活检这一有创性检查手段，由于这一技术本身的技术要求、侵入性及家长和患儿存在的恐惧心理等诸多因素，使得对慢性肾病患儿的肾脏穿刺仅在频繁复发或治疗效果不佳等情况下才能进行，可能会错失治疗肾脏纤维化、延缓肾脏损伤的最佳时机。

近年来，尿液中微小RNA(microRNA，miRNA)引起了人们的关注。miRNA 是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小RNA，通过与靶基因mRNA互补结合而调控靶基因的表达，参与生物体内的多种病理生理过程。miRNAs可以稳定存在人的体液中，因此可以作为基本诊断的标志物。已有研究发现尿液中 miRNA的表达水平与肾脏疾病密切相关，如狼疮性肾炎、IgA肾病、急性肾损伤等。但尚未有有关尿液中miR-214作为肾脏纤维化的生物标志物的报道。

发明内容

本发明意外的发现了尿液中miR-214可以作为肾脏纤维化的生物标志物，尤其发现在慢性肾脏病患儿尿液中miR-214的表达降低，与蛋白尿的程度呈负相关。

本发明进一步提出了一种通过检测尿液中miR-214预测肾脏纤维化程度的试剂盒，所述试剂盒包括miR-214逆转录相关引物、miR-214 PCR相关引物、逆转录Mix试剂、逆转录缓冲液、实时定量PCR Mix反应试剂、内参U6逆转录相关引物、U6 PCR相关引物、逆转录Mix的试剂和PCR Mix反应试剂。其中， miR-214及U6逆转录和PCR相关引物购自广州锐博生物科技有限公司。逆转录 Mix试剂购自日本Takara公司，实时定量PCR Mix反应试剂购自南京诺唯赞生物科技有限公司。

具体地，所述试剂盒包括盒体和盒盖，其中，

所述盒盖的内表面分别设置有可擦涂磁性板和条码区，所述条码区包含试剂盒中试剂保存和配置信息，可擦涂磁性板可用于实验人员随手记录实验信息；

所述盒体包括上、中、下三层，其中，上层和中层相同，均被分为8个分区，每个分区内设置试管孔，分别用于放置装有miR-214逆转录相关引物的试剂管、装有miR-214 PCR相关引物的试剂管、装有逆转录Mix的试剂管、装有逆转录缓冲液的试剂管、装有实时定量PCRMix反应试剂的试剂管、装有内参U6逆转录相关引物的试剂管和装有U6 PCR相关引物的试剂管以及白板笔；

盒体的下层被分隔为两个空腔，两个空腔内分别设置有可抽拉的抽屉，在可抽拉的抽屉内分别填充冷冻材料。

优选地，所述的可抽拉的抽屉外侧设置有拉环。

盒体的中层和下层之间通过隔板隔开。

有益效果