[发明专利]猪肺炎支原体培养基及制备方法和其在疫苗中的应用

权利要求书

1.一种猪肺炎支原体培养基，其特征在于，所述猪肺炎支原体培养基由基础培养基和辅助培养基组成，其中，所述基础培养基由20×Hank’s 25-35mL、PPLO肉汤粉 2-3g、酵母提取物2-5g、乳清蛋白水解物0.5-3g、脑心浸液粉3-5g、1%氯化锌溶液0.5-1mL、0.25% 酚红溶液10 mL和去离子水850-900ml组成，辅助培养基由5％精氨酸溶液3-4mL、5％半胱氨酸溶液2-3mL、1%牛磺酸溶液1-2mL，5％辅酶Ι1-5mL、10万U/ml青霉素5-10mL和灭活的健康猪血清70-90mL组成；

所述的猪肺炎支原体培养基的制备方法包括如下步骤：

第一，基础培养基的配制：按配比量取20×Hank’s 25-35mL、PPLO肉汤粉 2-3g、酵母提取物2-5g、乳清蛋白水解物0.5-3g、脑心浸液粉3-5g、1%氯化锌溶液0.5-1mL、0.25% 酚红溶液10 mL和去离子水850-900ml，搅拌均匀，10M NaOH调pH至7.2-7.4，120℃高压灭菌15min，冷却至室温；

第二，辅助培养基的配制：按配比量取过滤除菌的5％精氨酸溶液3-4mL、5％半胱氨酸溶液2-3mL、1%牛磺酸溶液1-2mL，5％辅酶Ι1-5mL、10万U/ml青霉素5-10mL和56℃Co₆₀辐照灭活的健康猪血清70-90mL；

第三，使用前，将辅助培养基添加到冷却的基础培养基中混合均匀，用1M NaOH调pH至7.6，即得到所述的猪肺炎支原体培养基。

2.根据权利要求1所述的猪肺炎支原体培养基，其特征在于，所述基础培养基由20×Hank’s 30mL、PPLO肉汤粉 2.5g、酵母提取物3g、乳清蛋白水解物2g、脑心浸液粉4g、1%氯化锌溶液0.75mL、0.25% 酚红溶液10 mL和去离子水870ml组成；所述辅助培养基由5％精氨酸溶液3.5mL、5％半胱氨酸溶液2.5mL、1%牛磺酸溶液1mL，5％辅酶Ι3mL、10万U/ml青霉素8mL和灭活的健康猪血清75mL组成。

3.根据权利要求1所述的猪肺炎支原体培养基，其特征在于，所述基础培养基由20×Hank’s 35mL、PPLO肉汤粉 3g、酵母提取物2g、乳清蛋白水解物3g、脑心浸液粉3g、1%氯化锌溶液1mL、0.25% 酚红溶液10 mL和去离子水850mL组成，辅助培养基由5％精氨酸溶液4mL、5％半胱氨酸溶液3mL、1%牛磺酸溶液1mL，5％辅酶Ι5mL、10万U/ml青霉素7mL和灭活的健康猪血清70mL组成。

4.根据权利要求1所述的猪肺炎支原体培养基，其特征在于，所述基础培养基由20×Hank’s 25mL、PPLO肉汤粉 2g、酵母提取物5g、乳清蛋白水解物0.5g、脑心浸液粉5g、1%氯化锌溶液0.5mL、0.25% 酚红溶液10 mL和去离子水880ml组成，辅助培养基由5％精氨酸溶液3mL、5％半胱氨酸溶液2mL、1%牛磺酸溶液1mL，5％辅酶Ι2mL、10万U/ml青霉素5mL和灭活的健康猪血清90mL组成。

5.根据权利要求1-4任一项所述的猪肺炎支原体培养基在生产猪肺炎支原体疫苗中的应用，所述培养基能够快速分离和培养猪肺炎支原体，培养猪肺炎支原体的滴度可以达到10¹⁰-10¹¹CCU，培养时间最低可至42h。