[发明专利]钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子的制备方法和应用

权利要求书

1.一种钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子的制备方法，其特征为该方法包括以下步骤：

a）将氧化石墨烯分散液超声破碎30-120分钟，之后离心除去微米级别的氧化石墨烯；所述的氧化石墨烯分散液浓度为0.5-5mg/mL；

b）将上步得到的溶液用微孔滤膜过滤，得到纳米氧化石墨烯；

c）在50-80℃下，将氧化石墨烯、钙调蛋白结合靶肽、氢氧化钾加入到水中搅拌10-20小时；其中，质量比为氧化石墨烯：钙调蛋白结合肽：氢氧化钾：水=20-50：2-5：100-500：2000-10000；

d）反应完成后，冷却至室温，经超滤管洗脱，得到钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子；

所述的的钙调蛋白结合靶肽是氨基酸序列为NH2-QASERGHITRKKLKGEKK-COOH的靶肽。

2.如权利要求1所述的钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子的制备方法，其特征为所述步骤a）中，超声破碎的超声功率50-200W，离心速度为2000-5000转/分。

3.如权利要求1所述的钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子的制备方法，其特征为所述b）中微孔滤膜材质为尼龙、混合纤维素酯、聚偏氟乙烯、聚醚砜、聚丙烯聚或四氟乙烯，微孔的尺度为0.22或0.45微米。

4.如权利要求1所述的方法制备的钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子的应用，其特征为用于体外调控离子通道或体外调控钙调蛋白的构象变化。

5.如权利要求4所述的方法制备的钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子的应用，其特征为所述的体外用于调控离子通道，包括以下步骤：

a)将细胞接种在铺有细胞爬片的24孔板中，待细胞生长24小时后，每孔加入50μL孵育完成的液体，然后继续培养18～36小时；加入钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子，放入培养箱中继续孵育2-6小时；

其中，细胞接种密度为0.5×10⁵-5×10⁶，所述的孵育完成的液体的孵育步骤包括：将2微克离子通道质粒与6μL X-tremeGENE HP DNA 转染试剂在200μL Opti-MEM培养基里混合，静置20分；

b) 取出爬片，用缓冲液清洗，用近红外光照射爬片上的细胞3-8分钟，完成离子通道的调控；

所述a）中 钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子加入后在24孔板中溶液的浓度为5-50μg/mL。

6.如权利要求5所述的方法制备的钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子的应用，其特征为所述b）中，所述缓冲液为HEPES缓冲液、台氏液、Tris缓冲液、PB缓冲液或PBS缓冲液。

7.如权利要求5所述的钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子的应用，其特征为所述近红外光的波长为750～1500nm，光照强度为0.5-4 W/cm²。

8.如权利要求5所述的钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子的应用，其特征为所述的细胞为HEK 293细胞。

9.如权利要求5所述的方法制备的钙调蛋白特异性结合靶肽修饰的还原型氧化石墨烯纳米粒子的应用，其特征为所述a）中培养箱中为5%二氧化碳，37℃。