[发明专利]一种甜椒核雄性不育两用系的选育方法

权利要求书

1.一种甜椒核雄性不育两用系的选育方法，其特征在于，包括以下操作：

1)以甜椒核雄性不育两用系AB91群体内的不育株为母本，其雄性不育性由一对隐性核基因msms控制；以具有显性基因MSMS的甜椒自交系为父本，进行杂交后获得杂交种F1代；

2)种植杂交种F1代，F1代表现全可育，可育株基因型为MSms，可育株自交留种，得到自交种F2代；

3)将自交种F2代播种在育苗穴盘中，F2代育性开始分离，其群体内有不育株和可育株，可育株有两种基因型MSMS和MSms；

4)在F2代幼苗长到4-5片叶大小时，每个单株分别编号，分别取嫩叶提取DNA并编号；

以P1、P2作为引物对提取的甜椒幼苗叶片DNA进行PCR扩增，扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并银染；

其中，前端引物P1为：TAAAACACGGGATGCAGCTACTA；

后端引物P2为：AAGTTCCTTTTCGTGTAACGACC；

电泳结果中扩增出片段大小为75bp特异性条带的单株为不育株，其基因型为msms；扩增出片段大小为150bp特异性条带的单株为纯显性可育株，基因型为MSMS；扩增出片段大小分别为75bp和150bp特异性条带的单株为杂合基因可育株，基因型为MSms；

在苗期淘汰纯显性可育株，保留不育株和杂合基因可育株；

5)将保留的不育株和杂合基因可育株分别定植在网纱棚内，开花期淘汰农艺性状不良的不育株和可育株，分别选择符合育种目标性状的不育株与可育株成对测交，从不育株上收获测交组合种子，不同组合分别编号；

6)在网纱棚内分别种植不同测交组合，其育性表现分离，可育株与不育株分离比例符合1：1；淘汰农艺性状不良的测交组合，在符合育种目标性状的测交组合内，选择符合育种目标性状的不育株与可育株成对姊妹交；

采种时，根据父本、母本性状淘汰农艺性状不良及不符合育种目标性状的姊妹交组合，选择符合育种目标性状的姊妹交组合留种、分别编号；

7)将符合育种目标性状的姊妹交组合分别种植在网纱棚内，在这些姊妹交组合内，继续进行姊妹交，在保持后代育性分离比例均符合1：1的同时，对农艺性状进行淘汰、选择，连续3代姊妹交，得到符合育种目标性状的新的甜椒核雄性不育两用系。

2.如权利要求1所述的甜椒核雄性不育两用系的选育方法，其特征在于，所述的PCR扩增的反应总体系为20μL:DNA模板2μl、0.1μM的正反引物各1μl、10mmol/L dNTPs 1.6μl、10×PCR Buffer 2μl、5UTaq酶0.2μL，不足部分用ddH₂O补充；

PCR反应程序：94℃变性5min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；72℃延伸6min；4℃保存。

3.如权利要求1所述的甜椒核雄性不育两用系的选育方法，其特征在于，所述符合育种目标性状包括以下性状中的一种或几种：果实灯笼形、果大肉厚、抗病、座果率高。

4.如权利要求1所述的甜椒核雄性不育两用系的选育方法，其特征在于，所述的淘汰农艺性状不良的测交组合是淘汰熟性、果实性状、抗逆性、抗病性表现不良的植株。

5.引物对P1、P2作为与核雄性不育两用系AB91携带的隐性核不育基因紧密连锁的分子标记的应用；

所述的引物对P1、P2的核苷酸序列分别为：

P1：TAAAACACGGGATGCAGCTACTA；

P2：AAGTTCCTTTTCGTGTAACGACC。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，在甜椒核雄性不育两用系的选育过程中引物对P1、P2作为分子标记进行辅助育种选育的应用。