[发明专利]用于肝纤维化和肝硬化诊断的生物标志物和试剂盒及使用方法

权利要求书

1.可用于肝纤维化诊断的生物标志物，其特征在于，包括多种代谢物，所述的代谢物选自胆汁酸、氨基酸和脂肪酸，这些代谢物中至少一种在受试体生物样本中与对照样本中差异表达；所述生物样本可选自来源于受试体的尿液、血浆或血清；所述生物标志物可任选地与临床指标结合用于受试体肝纤维化诊断。

2.如权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述代谢物选自下列代谢物中一种或多种：甘氨猪去氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨熊去氧胆酸、牛磺猪去氧胆酸、牛磺胆酸、7-酮胆酸、牛磺熊去氧胆酸、肉豆蔻酸、棕榈油酸、芥酸，顺式-13,16-二十二碳二烯酸、神经酸、花生四烯酸、亚油酸、反亚油酸、顺式-7,10,13,16-二十四碳四烯酸、二十碳二烯酸、酪氨酸、天冬氨酸、β-丙氨酸和缬氨酸，所述临床指标指受试体年龄和血浆中的血小板计数、天门冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶水平。

3.如权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述代谢物包括反亚油酸、牛磺胆酸、酪氨酸和缬氨酸。

4.如权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述代谢物包括牛磺胆酸和酪氨酸。

5.包含如权利要求1至4任一所述的生物标志物的试剂盒的使用方法，通过测试受试体血浆或血清中生物标志物的水平，任选地结合临床指标，测试受试体肝纤维化程度和肝纤维化分期，所述临床指标包括受试体年龄、受试体血浆中的血小板计数，天门冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶水平，将上述测试结果输入随机森林模型或梯度提升树模型进行统计计算。

6.一种用于肝纤维化诊断的试剂盒，其特征在于，包含权利要求3所述的生物标志物的标准溶液和一种内标标准溶液，所述内标标准溶液指同位素标记的诊断标志物反亚油酸、牛磺胆酸、酪氨酸和缬氨酸，同位素标记方式可以是2H或13C。

7.如权利要求6所述的肝纤维化诊断试剂盒，其特征在于，还包含萃取液，萃取液由甲醇和乙腈组成，甲醇和乙腈的体积比为：1：1-5：1。

8.如权利要求7所述的肝纤维化诊断试剂盒，其特征在于，还包含700μL的96孔板、350μL的V型96孔板、封板硅胶、96孔密封铝膜。

9.如权利要求6至8任一所述的诊断试剂盒的使用方法，通过测定受试体的血清或血浆中代谢物反亚油酸、牛磺胆酸、酪氨酸和缬氨酸的水平，并将这些测定值输入随机森林模型得到截断值进行判定。

10.如权利要求6至8任一所述的诊断试剂盒的使用方法，通过测定受试体的血清或血浆中代谢物反亚油酸、牛磺胆酸、酪氨酸和缬氨酸的水平，并将这些测定值输入梯度提升树模型得到截断值进行判定。

11.如权利要求8所述的诊断试剂盒的使用方法，包括下列步骤：

a)配制不同浓度的代谢产物标准品溶液；

b)配制内标标准品溶液配制；

c)制备受试体血清或血浆样本；

d)将c)中制得的样本以液相色谱和质谱进行测定，计算样本中代谢产物的浓度；

e)将d)中计算得到的生物标志物的浓度输入随机森林模型或梯度提升树模型进行计算，按照分值对受试体的肝纤维化程度进行判定。

12.一种用于肝纤维化诊断试剂盒，其特征在于，包含权利要求4所述的代谢物的标准溶液和一种内标标准溶液，所述内标标准溶液指同位素标记的诊断标志物牛磺胆酸和酪氨酸的溶液，同位素标记方式可以是2H或13C。

13.如权利要求12所述的肝纤维化诊断试剂盒，其特征在于，还包含萃取液，萃取液由甲醇和乙腈组成，甲醇和乙腈的体积比为：1：1-5：1。