[发明专利]一种用于植物多糖的分离纯化方法

说明书

本发明涉及一种多糖提纯方法技术领域，尤指一种用于植物多糖的分离纯化方法，主要包括以下步骤：1）将植物粉碎得到植物粉末；2）添加植物粉末、果胶酶、纤维素水解酶进行反应；3）添加乙酸‑乙酸钠缓冲溶液调节pH值，在缓冲溶液中进行酶解；4）添加去离子水提取；5）先后用快速、慢速定性滤纸进行抽滤获得提取液；6）添加硫酸锌搅拌溶解；7）添加氢氧化钠溶液搅拌静置；8）再次抽滤收集滤液；9）减压浓缩滤液，干燥后得到纯化多糖；本发明目的在于采用活性胶体对天然产物的吸附分离技术，利用胶体粒子的高分散性、高吸附性、以及可通过调节胶体粒子的带电性，对不同杂质进行吸附，包括蛋白质和各类黄酮、酚类等带色物质，从而最大程度地分离纯化植物多糖并保障植物多糖结构不被破坏。

技术领域

本发明涉及一种多糖提纯方法技术领域，尤指一种用于植物多糖的分离纯化方法。

背景技术

人类预防和治疗疾病的来源物质，重要来源之一是天然产物，世界各地的各种传统医药学中所使用的药物或保健品均属于天然来源的物质，在现代医药学应用中，纵然是化学药物，其中的天然来源的化合物也超过了30％占比，天然产物活性物质结构新颖、疗效高，使用后产生副作用少，因此越来越多的药物是以天然产物活性物质为先导化合物经过结构修饰而研发，目前天然产物的获取方法包括提取和纯化。

关于天然产物的获取方法，其中的提取技术主要分为超声波辅助方法、索氏提取方法、醇提方法、微波辅助提取的方法、稀酸或者稀碱液浸提方法、酶解方法、热水提取方法等几类方法，这些提取技术属于目前较为成熟的工艺技术，操作方法比较简单；而分离纯化方法是天然产物开发利用的难点和重点，目前分离纯化有两个方向需要平衡：1)提取物的纯净度、2)提取工艺的经济性，当提取工艺严谨缜密程度较高时，一般可以使得产品纯度提高，但随着工艺步骤的繁琐延长，产品的提取率降低，能耗增加，消耗更多的水和其他溶剂，并加重环境负荷，且根据不同类型的提纯产物，纯化工艺不同，需要研制多种纯化工艺以提纯不同产物。

糖蛋白由多糖和蛋白质构成，能够识别和接受细胞所需的特定物质，进而向细胞内部传递信息，实现生物催化和物质转换的生理过程；多糖由许多个单糖分子聚合而成，且广泛存在于动植物体内和微生物的细胞壁中，它是构成生命的四大基本物质之一；现已发现多糖化合物具有数百种，随着生物技术和化学提纯技术的发展，越来越多的多糖化学结构和药理作用被人们逐步发现并加以应用；然而，不同物种的多糖由于其结构、分子量、溶解度的不同导致的其药理作用各不相同，并且体现出了丰富多彩的生物活性，不同的多糖的生理作用包括：抗肿瘤作用、降低血糖作用、抗衰老作用、抗辐射作用和增强免疫力作用等。

多糖提取后的纯化方法有多种，以水热法提取物为例，包括活性炭吸附法、醇沉法、膜过滤法、氧化脱色法、石灰乳沉淀脱色法、离子交换树脂脱色法、絮凝剂脱色法、柱层析法和电泳法等；实际的多糖纯化技术往往是多个方法组合使用，如采用氧化脱色法后采用膜分离，然后采用柱层析法继续纯化；这几种纯化技术总结下可分为几类：化学氧化法(通过氧化破坏各种脱色物质而纯化多糖)、吸附法(通过物理和化学吸附来纯化多糖，如活性炭吸附法、石灰乳沉淀脱色法、离子交换树脂脱色法和絮凝剂脱色法)、层析洗脱法(柱层析法)、电泳法(通过电场对不带电多糖进行分离)、溶剂法(醇沉法，通过乙醇等调节溶液极性，进而分理出多糖)和过滤法(膜过滤法)。

化学氧化法的好处是方便快速，但会氧化破坏多糖，影响其活性；吸附法纯化效率低，多糖与其他杂质被一起吸附；电泳法热效应对对产物活性有较大影响，能耗大；溶剂法消耗大量溶剂，溶剂回收需要消耗大量能源，废溶剂对环境破坏大；膜过滤法的膜材的价格高，膜过滤能耗大，成本高；以白术多糖水热法提取，层析法纯化为例，得到的白术多糖粗提取试样再采用Sevag法纯化，当白术多糖的提取纯化工艺中经过H₂O₂氧化脱色，严重影响白术多糖的活性；采用Sevag法脱蛋白，或采用透析初步纯化、采用DEAE纤维素柱层析，均为工艺复杂的方法，仅适合实验室纯化，如用于工业生产，成本过高，工业生产中无法长期承担。

发明内容