[发明专利]基于免疫磁珠标记的SERS分选方法

说明书

本发明提出一种基于免疫磁珠标记的SERS分选方法，包括：S1.在每种目标细胞均特有的表面受体上，标记修饰有与该表面受体配对的抗体的免疫磁珠；S2.筛选出目标细胞；S3.根据每种目标细胞所特有的表面受体，分别在每种目标细胞上，标记修饰有与该表面受体配对的抗体的SERS‑TAG；S4.分别对标记后的每个目标细胞进行表面增强拉曼检测以确定其种类，根据目标细胞的种类对目标细胞进行分类。本发明能够在一次检测中完成多种CTC检测，且能大大减少表面增强拉曼检测的数量及SERS‑TAG的用量，减少光学检测时间,并节约成本。

技术领域

本发明属于细胞分选和光学工程的交叉技术领域，具体涉及一种基于免疫磁珠标记的SERS分选方法。

背景技术

免疫磁珠在分子及细胞生物学方面已得到了广泛应用，包括核酸提取、特定蛋白质与细胞的分选和富集等。以基于免疫磁珠的细胞分选为例，该过程共分为四个步骤：(1)用特异性配体或抗体对磁珠进行表面修饰；(2)将经过修饰的磁珠通过抗原—抗体反应或配体—受体结合反应与样品中目标细胞进行结合；(3)通过磁力吸附磁珠—细胞结合体；(4)通过冲洗等手段除去其它细胞。

现有基于免疫磁珠的细胞筛选技术直接通过磁力对磁珠进行吸引，导致其对于与细胞结合的免疫磁珠和未结合的免疫磁珠没有区分能力，在对磁珠进行表面增强拉曼、杂散磁场测量等进一步定性/定量检测时无法除去由未结合的磁珠引起的噪声信号，限制了免疫磁珠的进一步应用。

在实验室研究中，国际顶尖研究单位已通过在磁传感器上表面制备特异性抗体的方式，与目标细胞表面抗原结合，从而将目标细胞成功捕获在磁传感器上方。再通过流体冲洗，就可以实现磁标记细胞的筛选。

但是，现有实验室磁传感器的检测方案中，依靠目标细胞表面抗原和传感器上方抗体的结合来实现目标细胞的捕获，并依靠流体冲刷来除去未结合的磁珠。该方案可以除去其它细胞与未结合的磁珠，但难以保证微量目标细胞被成功捕获。并且，这一方案使用了化学结合的方式，对循环肿瘤细胞等极微量的细胞难以保证成功捕获，这样就会在诊断中引起误诊。另外，这种通过抗体—抗原结合捕获目标细胞的方法需要人工参与，而且必须需要专业的技术人员才能够完成，不利于集成，无法满足大数据时代的信息化需求。

另外，采用免疫磁珠对目标细胞上特有的抗原或受体进行标记，这种方法在特定情况下只能分选出一种目标细胞,无法确认全血样品中是否含有其他种类肿瘤细胞。但是在实际应用中，例如对全血样品进行肿瘤细胞检测时，只分离出一种肿瘤细胞，不足以确认全血样品中是否还含有其他种类的肿瘤细胞，无法进一步为肿瘤细胞的检测(例如DNA测序等)提供准确的检测样品信息。同时，不同的肿瘤细胞上也可能存在相同的抗原或受体，用免疫磁珠标记后可以一次分选出多种肿瘤细胞，此时，难以确定肿瘤细胞的具体种类，无法为后续癌症诊断提供准确的检测样品信息，进而节省后续检测周期及成本。而直接利用SERS检测，需要使用大量SERS-TAG进行标记，造成浪费，且通过光学系统时间非常长，效率极低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于免疫磁珠标记的SERS分选方法，该方法采用物理的方式实现细胞筛选，极大的提高目标细胞的捕获率，且能够在一次检测中完成多种CTC检测，且能大大减少表面增强拉曼检测的数量及SERS-TAG的用量，减少光学检测时间并节约成本。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：基于免疫磁珠标记的SERS分选方法，包括如下步骤：

一种基于免疫磁珠标记的SERS分选方法，包括如下步骤：

S1.在每种目标细胞均特有的表面受体上，标记修饰有与该表面受体配对的抗体的免疫磁珠；

S2.筛选出目标细胞；

S3.根据每种目标细胞所特有的表面受体，分别在每种目标细胞上，标记修饰有与该表面受体配对的抗体的SERS-TAG(表面增强拉曼标记)；