[发明专利]一种免疫球蛋白含量检测试剂及其制备方法

权利要求书

1.本发明涉及一种免疫球蛋白含量检测试剂及其制备方法，其特征在于：

包括样品缓冲液、孵育缓冲液、上样缓冲液和免疫球蛋白检定缓冲液；

所述各组分按重量份配比为：所述样品缓冲液15-25份，所述免疫球蛋白检定缓冲液15-25份，所述孵育缓冲液40-60份，所述孵育缓冲液25-10份，所述上样缓冲液15-25份；

所述样品缓冲液由15mMNP-40溶液、15mM钒酸钠溶液、15mMPBS溶液、15mM氟化钠溶液、15mM磷酸氢钾溶液、250mM盐酸溶液和40mM氯化钠溶液调配制成；

以所述样品缓冲液为150重量份，所述15mMNP-40溶液的含量比例优选15-25重量份范围；所述15mM钒酸钠溶液的含量比例优选8-25重量份范围；所述15mMPBS溶液的含量比例优选5-15重量份范围；所述15mM氟化钠溶液的含量比例优选5-15重量份范围；所述15mM磷酸氢钾溶液的含量比例优选25-40重量份范围；用所述250mM的盐酸溶液的含量比例优选2-8重量份范围；余下部分为所述40mM氯化钠溶液；

所述孵育缓冲液由5mM氟化钠溶液、10mM甘油、10mM焦磷酸钠酶抑制剂、5mM亮肽酶素溶液、10mM蛋白酶抑制剂和10mM氯化钠溶液调配制成；

以孵育缓冲液为100重量份，10mM氟化钠的含量比例优选2-8重量份范围；20mM甘油的含量比例优选10-35重量份范围；10mM焦磷酸钠酶抑制剂的含量比例优选1-5重量份范围；30mM亮肽酶素溶液的含量比例优选1.5-8重量份范围；15mM蛋白酶抑制剂的含量比例优选0.5-2.5重量份范围；余下部分为10mM氯化钠溶液；

所述上样缓冲液由25mM硝基苯酚溶液、15mMSDS溶液、次血红素和15mM氮化钠溶液调配制成；以所述上样缓冲液为150重量份，所述25mM硝基苯酚溶液的含量比例优选25-35重量份范围；所述15mM SDS溶液的含量比例优选15-45重量份范围；所述次血红素的含量比例优选0.2-0.8重量份范围；余下部分为所述15mM氮化钠溶液。

所述免疫球蛋白检定缓冲液由25mMTween-80溶液、25mM氮化钠溶液、5mM氮化钠溶液、25mMPEG-6000溶液和25mM氯化钾溶液调配制成；

以所述蛋白质交联缓冲液为150重量份，所述25mMTween-80溶液的含量比例优选15-40重量份范围；所述25mM氮化钠溶液的含量比例优选2-15重量份范围；所述5mM氮化钠溶液的含量比例优选5-10重量份范围；所述25mMPEG-6000溶液的含量比例优选2-15重量份范围；余下部分为所述25mM氯化钾溶液；

一种免疫球蛋白含量检测试剂的使用方法，如以下步骤所示：

S1、测定5mM氯化钠溶液的吸光度为B₁，将5mM氯化钠溶液和血清样本按照体积比50:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A₁，将5mM氯化钠溶液和已知免疫球蛋白的浓度的已测标准样品按照体积比50:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A₁'；

S2、测定所述免疫球蛋白含量检测试剂的吸光度为B₂，将5mM氯化钠溶液、所述免疫球蛋白含量检测试剂、血清样本按照体积比:20:5:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A₂，将5mM氯化钠溶液、所述免疫球蛋白含量检测试剂、已知免疫球蛋白的浓度的已测标准样品按照体积比20:5:1进行混合，混合均匀后在37℃孵育5min，测定其吸光度为A₂'；

S3、所述血清样本中所述免疫球蛋白含量，通过公式一计算：

D＝ΔA/ΔAs*C

其中：

D为所述血清样本中所述免疫球蛋白的浓度；

ΔA为以空白管吸光度为对照的样本管吸光度，通过公式二计算：

ΔA＝(A₂-A₁)-(B₂-B₁)

ΔAs为以空白管吸光度为对照的已测标准样品吸光度，通过公式三计算：

ΔAs＝(A₂'-A₁')-(B₂-B₁)

C为已测标准样品中免疫球蛋白的浓度。