[发明专利]美洲大蠊断肢再生相关Wingless信号通路基因及其dsRNA的应用

说明书

本发明公开了美洲大蠊断肢再生相关Wingless信号通路基因及其dsRNA的应用，美洲大蠊断肢再生相关基因分别为Wg、Arr、Dsh，其中，Wg的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，Arr的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，Dsh的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。通过设计靶向沉默美洲大蠊断肢再生相关基因的dsRNA，可以实现对美洲大蠊的防治。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及美洲大蠊断肢再生Wingless信号通路相关基因及其dsRNA的应用。

背景技术

蟑螂原产于非洲，生活场地较潮湿、温暖、黑暗；喜欢躲藏在隐蔽的缝隙中；活动时间集中在夜晚，因此人类较难消灭其种群。美洲大蠊为较为常见的一种蟑螂，为杂食性昆虫，能进食酸甜苦辣咸的食物、昆虫尸体等，比较喜欢吃甜食。在无水无食的情况下也能存活多日；同时美洲大蠊的破坏力很强，损坏衣物，传播疾病，是一种常见的家庭卫生害虫。美洲大蠊幼虫具有极强的附肢(腿和触角等)再生能力，生存能力极强，极难防治。

从上世纪40年代开始，化学农药和有机杀虫剂在害虫防治实践中表现出高效的杀虫效果，为害虫防治带来了革命性改变。但随着其长期大量使用，农药残留、水源和环境污染、生物链中断、生态失衡等一系列负面问题日益凸显。目前市面用于蟑螂防治的产品主要以化学农药为主，随着人们对卫生环境重视的加强及蟑螂抗药性问题的出现，开发环境友好、高效、无毒的蟑螂防治方法成为攸关国家经济发展、社会进步和食品安全的关键问题。利用先进的生物防治技术(RNA干扰(RNAi))对害虫进行防治的探索正在不断增加。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：如何建立一种新型、安全、高效的美洲大蠊防治方法。

本发明的技术方案为：美洲大蠊断肢再生相关基因，分别为Wg、Arr、Dsh三个基因，其中，Wg的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，Arr的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，Dsh的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

一组靶向沉默权利要求1所述的美洲大蠊断肢再生相关基因的dsRNA，所述dsRNA有三个，分别靶向沉默Wg、Arr、Dsh三个基因，其中，靶向沉默Wg基因的dsRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示，靶向沉默Arr基因的dsRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示，靶向沉默Dsh基因的dsRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示。

上述所述的一组靶向沉默权利要求1所述的美洲大蠊断肢再生相关基因的dsRNA的制备方法，靶向沉默Wg基因的dsRNA通过以下方法制备：将SEQ ID No.4所示的基因片段克隆到pTOPO载体，命名为pTOPO-Wg，然后以pTOPO-Wg为模板，以两端含有T7启动子的引物SEQ ID No.7和SEQ ID No.8，进行PCR扩增，PCR产物通过T7RiboMAX^TMExpress RNAi System转录合成；靶向沉默Arr基因的dsRNA通过以下方法制备：将SEQ ID No.5所示的基因片段克隆到pTOPO载体，命名为pTOPO-Arr，然后以pTOPO-Arr为模板，以两端含有T7启动子的引物SEQ ID No.9和SEQ ID No.10，进行PCR扩增，PCR产物通过T7RiboMAX^TMExpress RNAiSystem转录合成；靶向沉默Dsh基因的dsRNA通过以下方法制备：将SEQ ID No.6所示的基因片段克隆到pTOPO载体，命名为pTOPO-Dsh，然后以pTOPO-Dsh为模板，以两端含有T7启动子的引物SEQ ID No.11和SEQ ID No.12，进行PCR扩增，PCR产物通过T7RiboMAX^TMExpressRNAi System转录合成。

dsRNA靶向的美洲大蠊断肢再生相关基因的核苷酸序列分别如SEQ ID No.4、SEQID No.5、SEQ ID No.6所示。