[发明专利]一种地衣芽孢杆菌发酵工艺及用于制备防止黄瓜灰霉病的微生物菌剂和生物有机肥

权利要求书

1.一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)菌种活化，将保存在超低温冰箱里的地衣芽孢杆菌菌管取出，在无菌条件下用接种环接入到斜面，将斜面放在生化培养箱，25℃培养24h；

(2)种子液的制备，无菌条件下，用接种环将活化后的菌种接入到装有专用培养基的三角摇瓶里；将三角摇瓶放在空气浴摇床里，控制转速165r/min，34℃培养24h；

(3)工业发酵，按照发酵罐体积60％配料，所选原料以及配比如下：将用报纸包有的纯度98％，浓度0.02ppm的硫酸锰塞进完整的鸡蛋壳中，按照原料质量百分比取高温豆饼粉3.2％，玉米粉4.3％，鱼粉0.3％，碳酸钙0.95％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.02％；通入蒸汽，物料灭菌处理，冷却至35℃接种；按罐压0.06Mpa，35℃，1:1.2通风量，转速180r/min进行发酵；在转孢率达30％时，将培养温度降至30℃；转孢率达到85％-90％停止；发酵结束制得发酵菌液。

2.根据权利要求1所述一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述步骤(1)中菌种活化的斜面制备方法：用三角摇瓶存放蒸馏水，称取营养琼脂完全溶于蒸馏水；将三角摇瓶放在灭菌锅，灭菌；待三角摇瓶冷却至45℃，每只无菌试管加入10ml液体制成斜面。

3.根据权利要求1所述一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述步骤(2)中种子液专用培养基组分按照质量百分比组成及制备方法如下：葡萄糖1％，淀粉1.5％，酵母粉1.8％，蛋白胨0.2％，碳酸钙0.3％，硫酸镁0.03％，清水补足，用氢氧化钠调pH至7，将培养基放在高压蒸汽灭菌锅，在121℃，0.1mpa条件下，灭菌30min，灭菌结束后，培养基冷却至室温，备用。

4.根据权利要求1所述一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述发酵菌液用于制备防止黄瓜灰霉病的微生物菌剂，所述微生物菌剂为质量百分比为10％的发酵菌液和质量百分比为90％的甜瓜蒂浸出液混合均匀而成。

5.根据权利要求4所述一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述微生物菌剂中的甜瓜蒂浸出液的制备方法为：将甜瓜蒂粉碎至80目，按照甜瓜蒂粉与水的质量比为1:50配料至灭菌罐，通入蒸汽，121℃灭菌30min，冷却至室温，通入无菌空气保压备用，取液体即得甜瓜蒂浸出液。

6.根据权利要求1所述一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述发酵菌液用于制备防止黄瓜灰霉病的生物有机肥，其特征在于，原料各组分按照重量份组成如下：花生壳粉55-60份、草木灰10-15份、牡蛎钙粉8-12份、鱼粉4-6份、金银花3-5份、月季花2-4份、仙人掌5-8份、腐植酸5-10份；发酵菌液的添加量为有机肥总质量的3-5％。

7.根据权利要求6所述一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述发酵菌液用于制备防止黄瓜灰霉病的生物有机肥的制备方法，具体包括如下步骤：

(1)先将金银花、月季花、仙人掌粉碎至40目，后与花生壳粉、草木灰、牡蛎钙粉、鱼粉搅匀；

(2)采用水泥地面堆积发酵，发酵温度控制在65-70℃，发酵时间：春秋15天，夏季10天，冬季20天；发酵期间进行补水，翻堆，以及补氧；

(3)发酵结束，向物料中加以质量百分比为3-5％发酵菌液，混合均匀。

8.根据权利要求4所述一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述微生物菌剂含有有效活菌数≥10亿/g，霉菌杂菌数≤3×10⁶/g，杂菌率≤10％，PH值为5.0-8.0，其施用方法为：亩用量50g，稀释500倍，地上部分喷施，其用于防止黄瓜灰霉病。

9.根据权利要求6所述一种地衣芽孢杆菌发酵工艺，其特征在于，所述生物有机肥含有有效活菌数≥2亿/g，有机质≥50％，水分≤30％，PH值为6.5-7.5，其用于防止黄瓜灰霉病。