[发明专利]一种新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法

权利要求书

1.一种新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法，其特征在于，该方法对新鲜烟叶中的SA、IAA、IBA、JA、ABA、GA3、BR这七种植物激素同时进行检测；具体操作包括如下步骤：

（一）对预处理后新鲜烟叶进行萃取

首先，对待测新鲜烟叶进行预处理，具体而言：先用液氮速冻，冷冻干燥后，再用粉碎机打碎备用；

其次，用萃取溶剂对打碎后新鲜烟叶进行萃取；

所述萃取溶剂为甲醇与水混合物，以体积比计，甲醇：水=3~5：1；

萃取时，采用超声辅助萃取；

（二）制备待检液

分离获得步骤（一）中含有植物激素的萃取相，冷冻、离心，取上清液过固相萃取小柱富集后收集液体，将该液体冷冻干燥；

将冷冻干燥后的样品复溶后离心，取上清液备用待检；

（三）液相色谱-串联质谱检测分析

液相色谱、质谱分析时，具体参数参考设置如下：

色谱柱：采用SB-C18超高压柱，柱的规格为：2.1 mm×100 mm，1.8 μm；

色谱检测分析时：

柱温30℃；

流动相为：A，含0. 1%甲酸的水；B，含0. 1%甲酸的甲醇；

流速：0.3 mL/ min；进样量：1μL；

梯度洗脱：

0 min：95% A+5% B；

0.2 min：52% A+48% B；

7 min：43% A+57% B；

7.5 min：4% A+96% B；

10 min：100% B；

质谱检测分析时：

离子源：电喷雾离子源，正/负离子扫描，多反应检测扫描；

干燥气温度：290℃；干燥气流量：12 L/min；

雾化器压力：40 psi；鞘气温度：200℃，鞘气流量：11L/min；

正离子电离模式下毛细管电压：4 kV；负离子电离模式下喷雾电压：3.5 kV。

2.如权利要求1所述新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法，其特征在于，定量分析时，7种植物激素的特征碎片离子为：

。

3.如权利要求2所述新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法，其特征在于，以目标组分定量离子的峰面积平均值Y对质量浓度X进行线性回归分析，得到7种植物激素的线性方程和相关系数R2 ；以信噪比S/N为3确定7种激素的检出限LOD，具体如下表所示：

。

4.如权利要求1所述新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法，其特征在于，步骤（二）中，所述固相萃取小柱为Elut C18固相萃取小柱。

5.如权利要求1所述新鲜烟叶中内源性植物激素的检测方法，其特征在于，步骤（二）中，所述复溶，采用0.1%甲酸-甲醇作为复溶溶剂。