[发明专利]一种纳豆激酶液态发酵方法

权利要求书

1.一种纳豆激酶生产方法，它包括：

1）豆渣加水调至水分含量为80~90% ，灭菌；

2）按3~10%接种量，接种活化的纳豆芽孢杆菌；

3）36~38℃摇床培养30~40小时； 4）离心取上清，上清液过滤除菌，得粗酶液，纯化；

4）喷雾干燥；

所述的纯化后的酶液按体积比1:3加入海藻糖麦芽糊精混合保护剂后再干燥；

所述的海藻糖麦芽糊精混合保护剂为：麦芽糊精6g、海藻糖12g，加入100mL蒸馏水；

5）干燥后的纳豆激酶在37℃下保存；

步骤2）所述的活化为：将纳豆芽孢杆菌粉，用无菌水溶解，稀释成10^-3~10^-6梯度，平板划线于含有2%琼脂的LB培养基上培养18h，然后挑取单菌落接入LB液体培养基中，活化三代，然后按3%接种量接于LB液体培养基中120rpm，37℃培养12h；菌液在高速冷冻离心机中，4℃、9500r/min离心10min；将离心后的菌体用无菌水洗涤两次，重悬，使菌悬液浓度调整至10⁷CFU/mL；

步骤4）所述的纯化为加入硫酸铵至饱和度达到50~90%，0~4℃静置10~20h，9000~10000rpm/min离心8~15 min，取沉淀，用缓冲溶液复溶，透析除盐。

2.根据权利要求1所述的一种纳豆激酶生产方法，其特征在于：步骤2）所述的接种量为8%。

3.根据权利要求2所述的一种纳豆激酶生产方法，其特征在于：步骤1）所述的灭菌为121℃温度下灭菌20min。

4.根据权利要求3所述的一种纳豆激酶生产方法，其特征在于：步骤4）所述的过滤为0.45～0.22µm的微孔滤膜过滤。