[发明专利]槟榔坏死环斑病毒及其检测方法

说明书

本发明属于生物技术领域，提供了一种槟榔坏死环斑病毒，该病毒命名为槟榔坏死环斑病毒ANRSV‑XC1，藏编号为CCTCC NO：V201829。本发明还提供了该病毒的检测方法，包含三方面：确立了核酸检测所需要的引物序列；确立了检测反应种类；确立了检测反应体系和反应条件。本发明从槟榔叶片中分离到的病毒，与已报道的马铃薯Y病毒科病毒都有显著不同，为马铃薯Y病毒科的一个新病毒属，为研究槟榔坏死环斑病提供了研究基础，在科学研究及经济作物保护上有较大的使用价值。而且本发明的检查方法能够准确快速地检测出该病毒，高效可靠，在科学研究及经济作物保护上也具有较大的价值。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及槟榔坏死环斑病毒及其检测方法。

背景技术

槟榔在海南是仅次于橡胶的第二大热带经济作物，被称为“绿金”，种植面积近140万亩，其产量占全国95％的份额，全省近230万农民种植槟榔并以此为生，其病虫害防治一直是政府、农户及科研机构最为关注的问题之一，而植物病毒病是目前病害中危害最大,防治最难的一类病害。而在最近的调研中，发现在定安、万宁、保亭等地，槟榔坏死环斑病毒病的发生率超30％，从槟榔叶片中分离到的病毒，经克隆测序并进入National Center forBiotechnology Information对比，发现其与已报道的马铃薯Y病毒科病毒都有显著不同，马铃薯Y病毒科是仅次于双生病毒科的第二大病毒科，该科病毒大多寄主范围广泛，常给农业生产带来严重危害。根据2017年International Committeeon Taxonomy of Viruses修订的分类系统，该科包括8个属，依据International Committeeon Taxonomy of Viruses的马铃薯Y病毒科属种划分的定义，该病毒可以作为马铃薯Y病毒科的一个新病毒属。

该病毒为线状病毒，长约800nm，宽约15nm，典型症状表现为病株中部和下部叶片出现褪绿环斑和坏死环斑，发病后期病斑蔓延扩展致使叶片坏死，影响植株生长。

病毒核酸检测是病毒检测重要方法之一。目前，国内外并未报道发现该属病毒，也无针对该属病毒的核酸检测方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种槟榔坏死环斑病毒及其检测方法。一方面该病毒为研究槟榔坏死环斑病提供了研究基础，在科学研究及经济作物保护上有较大的使用价值。另一方面本发明的检查方法能够准确快速地检测出该病毒，高效可靠，在科学研究及经济作物保护上也具有较大的价值。

本发明的第一个方面是提供了一种槟榔坏死环斑病毒，该病毒命名为槟榔坏死环斑病毒(Areca palm necrotic ring-spot virus)ANRSV-XC1，于2018年6月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址位于中国武汉的武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：V201829。该病毒基因组全序列已上传至National Centerfor Biotechnology Information，编号为MH395371。

本发明的第二个方面是提供一种如本发明第一个方面所述的槟榔坏死环斑病毒的检测方法：

针对病毒基因组中保守区域设计引物对，进行聚合酶链式反应，反应产物进行凝胶电泳检测，如果出现相应的核酸电泳条带，则判断为阳性，否则判断为阴性；其中，所述引物对为：

上游引物ANRSV CP 390F：5’-GGTGTCAGATAATGGAACAAGT-3’，

下游引物ANRSV CP 830R：5’-CATGATCATAGCATGGCCAGT-3’；

相应的核酸电泳条带为440bp。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，聚合酶链式反应的反应体系和反应条件如下：