[发明专利]一种鸭大肠杆菌的高密度发酵方法

说明书

本发明公开了一种鸭大肠杆菌的高密度发酵方法，以高密度发酵培养基为基础，使用发酵罐进行鸭大肠杆菌高密度发酵。发酵过程中，设定pH7.0～7.5、温度36.5～37.5℃、转速90～420rpm、空气通气量1.2～5.2L/min。接种前流加适量消泡剂，接种后，待细菌OD₆₀₀nm达到4.0～6.0时，以流速10～25mL/h/L流加45～55(w/v)％葡萄糖溶液，流加葡萄糖的量为每升高密度发酵培养基流加葡萄糖50～100g。本发明所述的鸭大肠杆菌高密度发酵方法，基于高密度发酵培养基，其营养丰富，通过流加葡萄糖，可实现鸭大肠杆菌高密度发酵，可用于大规模发酵生产鸭大肠杆菌疫苗。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种鸭大肠杆菌的高密度发酵方法。

背景技术

鸭大肠杆菌病由致病性大肠杆菌引起，病理表现主要有急性败血症、气囊炎、全眼球炎、关节滑膜炎、输卵管炎和腹膜炎等。随着养殖规模的不断扩大，水禽饲养水域环境的不断恶化，大肠杆菌病已成为目前危害水禽养殖较为严重的细菌传染病之一。由于目前临床上广泛使用抗生素治疗大肠杆菌等细菌性疾病，导致大量耐药菌株的产生，因此，在大肠杆菌防治中使用疫苗免疫接种是行之有效的预防途径。

对于细菌疫苗，如何提高细菌菌数(即抗原含量)是细菌疫苗研究的关键技术之一。一般而言，抗原含量高的疫苗免疫机体后，能产生较高的抗体水平，抗体持续时间也较长。细菌高密度发酵技术业已成为细菌疫苗制备中常用的培养技术手段，该技术可提高单位体积培养液中菌体的浓度，进而提高体积产率。

致病性大肠杆菌为兼性厌氧菌，对培养条件要求不高，在普通的LB肉汤培养基中均能正常生长，然而难以实现其高密度发酵，致病性鸭大肠杆菌高密度发酵更是鲜有报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种鸭大肠杆菌的高密度发酵方法，该方法可实现致病性鸭大肠杆菌大规模高密度发酵，有效提高体积产率，降低生产成本。

本发明所采取的技术方案是：

一种鸭大肠杆菌的高密度发酵方法，包括以下步骤：将鸭大肠杆菌接种至高密度发酵培养基中进行发酵，发酵过程中，调节发酵液pH为7.0～7.5、发酵温度为36.5～37.5℃、搅拌转速90～420rpm、发酵液中空气通气量为1.2～5.2L/min；当发酵液OD₆₀₀nm达到4.0～6.0时流加葡萄糖溶液，当发酵液的OD₆₀₀nm值停止增长时，结束发酵；

所述高密度发酵培养基配方为：每升水中含有酵母浸出物30.0～40.0g，胰蛋白胨5.0～15.0g，大豆蛋白胨5.0～15.0g，水解乳蛋白5.0～10.0g，酪蛋白胨5.0～10.0g，胃蛋白胨4.0～7.0g，麦芽浸粉1.0～3.0g，磷酸氢二钾2.0～5.0g，甘油1.0～3.0mL，铁盐2.0～10.0mg，锰盐2.0～10.0mg，铝盐2.0～10.0mg。

进一步的，在接种前，先往高密度发酵培养基中加入适量消泡剂。

进一步的，流加葡萄糖溶液的速度为10～25mL/h/L。

进一步的，所述葡萄糖溶液的浓度为45～55(w/v)％。

进一步的，流加葡萄糖的量为每升高密度发酵培养基流加葡萄糖50.0～100.0g。

进一步的，所述铁盐选自硝酸铁、氯化铁、硫酸铁中的至少一种。

进一步的，所述锰盐选自硫酸锰、氯化锰中的至少一种。

进一步的，所述铝盐选自硫酸铝、氯化铝中的至少一种。

进一步的，鸭大肠杆菌的接种量为2％～10％。