[发明专利]一种含黄芪甲苷的髓核细胞抗衰老抗凋亡培养基

说明书

本发明涉及椎间盘组织工程及再生领域，特别涉及一种含有黄芪甲苷，特别是不含细胞因子的培养基用于髓核细胞培养，发挥抗衰老和抗凋亡作用的应用。

技术领域

本发明涉及椎间盘组织工程及再生领域，特别涉及一种含有黄芪甲苷，特别是不含细胞因子的培养基用于髓核细胞培养，发挥抗衰老和抗凋亡作用的应用。

背景技术

椎间盘主要由髓核、纤维环和软骨终板组成。髓核是椎间盘中含水量最高的组织，髓核细胞分泌的细胞外基质可形成胶冻样结构，使得髓核组织可以承受椎体的各种压力。在某些病理情况下，椎间盘可发生退变，进而导致下腰痛。目前针对椎间盘退变尚无有效治疗手段，采用组织工程手段构建人工椎间盘、以及异体移植椎间盘细胞是新兴的椎间盘退变行之有效的治疗方式。

构建组织工程椎间盘或异体椎间盘细胞移植都需要用到种子细胞，特别是髓核细胞。传统的髓核细胞培养条件都是采用高糖培养基，因为高糖培养环境有助于细胞快速扩增；但是高糖培养基同时可引发髓核细胞衰老和凋亡，而衰老、凋亡的髓核细胞在进一步应用过程中会严重影响修复效果。因此，需要开发行之有效的方法防止髓核细胞培养过程中的衰老和凋亡；但是目前尚无抗髓核细胞凋亡、衰老的培养基。

中国专利CN106754683A公开了一种人脐带/脂肪间充质干细胞的无分化扩增抗衰老培养基。该培养基应用于人脐带/脂肪间充质干细胞，而髓核细胞具有与干细胞完全不同的生物学特性和功能，因此该培养基不能应用于髓核细胞体外抗衰老、凋亡培养；另外，该培养基成分含有TGF-beta等11种细胞因子，以及硫辛酸等9中化学小分子，成分复杂、价格昂贵。

发明内容

本发明提出一种含黄芪甲苷(Astragaloside IV，AG-IV)，特别是不含细胞因子的髓核细胞抗衰老抗凋亡的培养基，解决了现有技术中用于培养髓核细胞的高糖培养基易引起髓核细胞衰老、凋亡的问题。

本发明提供一种培养基，所述培养基包括高糖型基础培养基和黄芪甲苷。

优选的，所述高糖型基础培养基为液体；

优选的，所述高糖型基础培养基选自DMEM培养基、F12培养基、DMEM/F12培养基或RPMI 1640培养基；

优选的，所述黄芪甲苷在培养基中的浓度为0.01-10μM；

更优选的，所述黄芪甲苷在培养基中的浓度为1-10μM；

优选的，所述培养基不含细胞因子。

进一步地，本发明还提供一种增加髓核细胞的TERT表达和端粒长度的方法，所述方法包括将髓核细胞用黄芪甲苷溶液处理；

优选的，所述髓核细胞因高糖环境导致TERT表达减少和端粒长度缩短；

优选的，所述黄芪甲苷溶液的浓度为0.01-10μM；

更优选的，所述黄芪甲苷溶液的浓度为1-10μM；

与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：本发明提供了一种含黄芪甲苷，特别是不含细胞因子的髓核细胞培养基，解决了现有技术中用于培养髓核细胞的高糖培养基易引起髓核细胞衰老、凋亡的问题，防止了培养过程中髓核细胞的衰老与凋亡，并有效改善髓核细胞的生长状态。

附图说明

图1为高浓度葡萄糖影响髓核细胞(NP细胞)存活率图，其中：

图1a为用不同浓度的葡萄糖处理髓核细胞24小时后的细胞计数试剂盒(CCK-8)检测结果。

图1b为用不同浓度的葡萄糖处理髓核细胞48小时后的细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测结果。

图1c为用不同浓度的葡萄糖处理髓核细胞72小时后的细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测结果。