[发明专利]一种粗梗水蕨的组培快繁方法

说明书

本发明公开了一种粗梗水蕨的组培快繁方法，包括以下步骤：(1)将粗梗水蕨的外植体洗净后切断，用75％乙醇处理8‑15s和0.1％氯化汞处理6‑10min进行消毒，接种于添加有N6‑呋喃甲基腺嘌呤的MS培养基中进行培养，MS培养基中N6‑呋喃甲基腺嘌呤的浓度为1‑3mg/L；(2)粗梗水蕨的叶柄培养至长出丛生芽后，转接到添加有吲哚丁酸的MS培养基中进行培养，MS培养基中吲哚丁酸的浓度为1‑1.5mg/L，培养至长出2‑4片叶片，得到试管苗；(3)将试管苗取出，移栽后进行培养，得到粗梗水蕨植株。接种在添加了N6‑呋喃甲基腺嘌呤的MS培养基中，丛生芽诱导率高，达到了90％以上；可缩短育苗周期，获得大量组培苗。

技术领域

本发明涉及一种粗梗水蕨的组培快繁方法，属于水生植物培育领域。

背景技术

水蕨科(Ceratopteridaceae)所有植物均为二级保护植物，其叶二型，形态变化较大，同时可食用和药用，具独特的景观价值和生态学意义。但由于水蕨类对其生活环境的水质要求较高，在污染较多的水域无法生长，因此野生水蕨植株越来越少见。

水蕨(Ceratopteris thalictroides(L.)Brongn.)已有快繁方法的报道，申请号为CN201210075022.5的发明专利《濒危蕨类植物水蕨的繁育方法》公布了一种通过水蕨孢子采集、接种于培养皿，在人工气候箱中培养获得幼苗的人工繁育方法，申请号为CN201410734844.9的发明专利《一种快速繁殖水蕨种苗的方法》公布了一种将水蕨的孢子接种到萌发培养基培养成幼苗、将幼苗切段后插入培养基中培养出幼芽，再将幼芽切成段进行继代培养，将幼芽接种到生根培养基培养至生根获得水蕨种苗的方法。

目前水蕨已有少量人工繁育苗在市场流通，但粗梗水蕨(Ceratopterispteridoides(Hook.)Hieron.)相对水蕨更为少见，处于野生状态，尚未被人工繁育开发。粗梗水蕨孢子叶可产生大量孢子，但孢子成熟时间不定，成熟后迅速飘散，难以采集，孢子寿命短，自然环境下萌发率低；粗梗水蕨幼苗冬季耐寒性差，极易冻死，而且对污染物、农药等较为敏感，多种原因导致幼苗成苗率低，野生粗梗水蕨种群量逐渐减少，濒临灭绝，因此做好粗梗水蕨迁地保护和人工繁育具有重要的意义。

发明内容

本发明解决的技术问题是，粗梗水蕨孢子叶材料难以获取、孢子成熟度无法保证的问题。因此，为扩繁培育更多粗梗水蕨种苗，针对粗梗水蕨进行组织培养实验研究，筛选出适宜该植物的快繁培养基以及培养方法。

本发明的技术方案是，提供一种粗梗水蕨的组培快繁方法，包括以下步骤：

(1)将粗梗水蕨的外植体洗净后切断，进行消毒，接种于添加有N6-呋喃甲基腺嘌呤的MS培养基中进行培养；

(2)粗梗水蕨的叶柄培养至长出丛生芽后，转接到添加有吲哚丁酸的MS培养基中进行培养，培养至长出2-4片叶片，得到试管苗，MS培养基中吲哚丁酸的浓度为1-1.5mg/L；

(3)将试管苗取出，移栽后进行培养，得到粗梗水蕨植株。

优选地，MS培养基中，N6-呋喃甲基腺嘌呤的浓度为1-3mg/L。

优选地，步骤(1)中，所述外植体为营养叶叶柄，将叶柄以上未伸展的叶片剪去，保留叶柄并切段，再进行消毒。

优选地，步骤(1)中，MS培养基中，N6-呋喃甲基腺嘌呤的浓度为2mg/L。

优选地，步骤(3)中，将试管苗移栽至经过消毒的培养土中，所述培养土由以下组分组成：65-75wt％泥炭、15-25wt％稻壳炭、8-12wt％蛭石。

优选地，采取浸盆给水的方式，控制培养土的湿度在75％～95％。

优选地，步骤(3)的培养过程中，采用8-12mg/L的纳米硅肥溶液进行叶面喷施，每周喷施一次。