[发明专利]益生菌蜂蜜柚子茶及其制备方法

权利要求书

1.益生菌蜂蜜柚子茶，其特征在于包括：柚子果实匀浆，果葡糖浆，白砂糖，蜂蜜，黄原胶，瓜尔胶，食用葡萄糖，低聚果糖，柠檬酸，DL-苹果酸，维生素C，三氯蔗糖，食品用香精，干酪乳杆菌，粪链球菌，激烈火球菌，巴氏甲烷八叠球菌，水。

2.根据权利要求1所的益生菌蜂蜜柚子茶，其特征在于其中干酪乳杆菌、粪链球菌、激烈火球菌、巴氏甲烷八叠球菌四者的浓度比为12:4:1:1。

3.根据权利要求1所述的益生菌蜂蜜柚子茶，其特征在于其中柚子果实匀浆的质量分数为48％，蜂蜜的质量分数为7％。

4.权利要求1所述益生菌蜂蜜柚子茶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取干酪乳杆菌菌株接种于5ml MRS培养基中，37℃培养18h，传代培养2次得到干酪乳杆菌种子液；将冻存的粪链球菌在TSA固体培养基上划线，置37℃培养16小时，待长出单菌落后，接种至LB液体培养基中，置37℃摇床以170rpm的转速培养6小时，OD600达到0.5，得到粪链球菌种子液；配制以下成分的培养基：K₂HPO₄ 0.4g，NH₄Cl 1g，MgCl₂ 0.1g，草酸钾2.0g，H₃BO₃ 1.5g，L-半胱氨酸-盐酸盐0.5g，酵母浸提物2.0g，维生素溶液10mL，乙酸钠10g，0.2％tris-HCl 1mL，向其中接入巴氏甲烷八叠球菌，于22℃厌氧条件下培养，至其中菌体浓度为10⁶cfu/mL；

2)将步骤1)所得的干酪乳杆菌种子液、粪链球菌种子液分别以2.5％(v/v)和1.0％(v/v)接入2倍浓度的RCM培养基中，先在18℃条件下静置15min，过程中以0.1vvm的速率持续通入氨气体积浓度为30％的氨气-空气混合气；而后停止通气，在容器中增压至2.5个大气压，以220rpm的转速震荡培养8h；停止震荡并泄压后，将步骤1)所得的巴氏甲烷八叠球菌培养液加入其中，调整其中巴氏甲烷八叠球菌浓度为10⁵cfu/mL，并向其中补加Na₂S至0.1g/L；而后持续向容器中通入无菌氮气，以30℃的初始温度、每小时升高1℃的培养条件培养24h，得到混合培养液；

3)取冻存的激烈火球菌菌株，在50％的甲醇水溶液中孵育2h，而后以每小时10℃的升温速度升温至80℃，保持，直至培养液体积剩初始体积的一半，将该菌液与步骤2)所得的混合培养液以25:1的体积比混合，而后在54℃共孵育48h；在54℃条件下离心、弃去上清，用无菌水洗涤3次，收集菌体，在54℃条件下真空干燥，得到混合菌体；

4)取柚子果实匀浆，果葡糖浆，白砂糖，蜂蜜，黄原胶，瓜尔胶，食用葡萄糖，低聚果糖，柠檬酸，DL-苹果酸，维生素C，三氯蔗糖，食品用香精，水，调配成为饮料，而后以每100mL该饮料对应0.8g混合菌体的比例向其中加入步骤3)所得的混合菌体，混匀，即得到所述益生菌蜂蜜柚子茶。

5.根据权利要求4所述的益生菌蜂蜜柚子茶的制备方法，其特征在于步骤4)中，在混合调配前先将白砂糖和蜂蜜混合，经一次过滤去除蜂尸和固体杂质，而后经二次过滤去除蜂蜡和固体杂质，再进行灭菌，而后再将该白砂糖和蜂蜜的混合物用于混合调配。

6.根据权利要求4所述的益生菌蜂蜜柚子茶的制备方法，其特征在于步骤4)中，所述柚子果实匀浆在混合调配前先进行腌渍。

7.根据权利要求4所述的益生菌蜂蜜柚子茶的制备方法，其特征在于步骤4)中，在共孵育48h的过程中，容器处于避光条件，容器中的气体替换为氢气体积浓度为5％的氢气-空气混合气。