[发明专利]Oct4泛素化修饰突变体在提高诱导体细胞重编程效率中的应用

权利要求书

1.一种非治疗性的细胞重编程的方法，其特征在于，所述的细胞重编程方法中，采用包含Oct4的转录因子组合诱导细胞重编程，所述Oct4氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示，其中所述的Oct4的泛素化位点发生突变，所述泛素化位点突变选自：

第118位，第121位，第133位，第137位和第144位的突变；或

第121位，第133位，第137位和第144位的突变；

其中，所述的突变是由赖氨酸突变为不能发生泛素化修饰的精氨酸。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的包含Oct4的转录因子组合包括：Oct4，Sox2、Klf4和c-Myc组合。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的包含Oct4的转录因子组合包括：Oct4，Sox2和Klf4。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的细胞是体细胞。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的体细胞包括：成纤维细胞，上皮细胞，血液细胞，神经细胞，胚胎细胞。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的体细胞为组织或器官来源的细胞。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，Oct4的泛素化位点的突变提高重编程过程中H3K4甲基化修饰水平，从而促进重编程；或Oct4的泛素化位点的突变减少Oct4的降解，增强Oct4的蛋白稳定性，从而促进重编程。

8. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：在细胞内过表达外源性Ash2l-b，使Ash2l-b水平上升；所述Ash2l-b的氨基酸序列如SEQ ID NO: 3所示。

9. 一种Oct4突变体，其特征在于，所述Oct4氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示，Oct4突变体中所述的Oct4的泛素化位点发生突变，所述的泛素化位点选自：

第118位，第121位，第133位，第137位和第144位的突变；或

第121位，第133位，第137位和第144位的突变；

其中，所述的突变是由赖氨酸突变为不能发生泛素化修饰的精氨酸。

10.编码权利要求9所述Oct4突变体的多核苷酸。

11.一种表达载体，其中包含编码权利要求9所述Oct4突变体的多核苷酸。

12.一种宿主细胞，其中包含权利要求11所述的表达载体，或包含编码权利要求9所述Oct4突变体的多核苷酸。

13.权利要求9所述的Oct4突变体的用途，用于作为细胞重编程的转录因子。

14.一种用于进行细胞重编程的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包括：权利要求9所述的Oct4突变体。

15.一种用于进行细胞重编程的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包括：能表达权利要求9所述的Oct4突变体的表达构建物。

16.如权利要求14或15所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括转录因子：Sox2、Klf4、c-Myc组合，Sox2与Klf4的组合，或能表达该Sox2、Klf4和/或c-Myc的表达构建物。

17. 如权利要求14或15所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括：Ash2l-b或能重组表达Ash2l-b的表达构建物；所述Ash2l-b的氨基酸序列如SEQ ID NO: 3所示。