[发明专利]一种免疫原性多糖疫苗及其鉴别方法

说明书

本发明涉及一种免疫原性多糖及其鉴别方法以及根据上述免疫原性多糖制备的多糖疫苗及其鉴别方法。免疫速率散射比浊至少包括将多糖抗原与相应抗体接触形成抗原抗体复合物，再经免疫速率散射比浊测定生成抗原抗体复合物的反应速率值。本发明的速率散射比浊法是一种基于免疫化学方法建立的技术手段，速率散射比浊法可测量悬浮于小杯中的颗粒所造成的散射光强度变化，可在几十秒内得出反应速率值。抗原抗体反应形成抗原抗体复合物聚集体颗粒，抗原或抗体浓度的不同形成颗粒的速率不同。该法特异性强，灵敏度高，节约检测时间，且抗原抗体直接接触，有利于低浓度样品检测，可用于疫苗生产过程中原液和/或半成品和/或成品的鉴别。

技术领域

本发明涉及医疗领域，具体的涉及疫苗及疫苗的鉴别，尤其是一种免疫原性多糖及其鉴别方法以及一种免疫原性多糖疫苗及其鉴别方法。

背景技术

细菌中存在的多糖物质，在细菌的识别、信号传递、黏附、感染及防御等方面发挥着重要作用，通过提取纯化细菌中引起特异性保护作用的多糖抗原，可生产具有特异性的多糖疫苗。接种多糖疫苗可预防多种疾病感染，控制好多糖疫苗质量尤其重要，只有疫苗被鉴别无误、组分正确后，才有必要进行检查和含量测定等分析工作。尤其在疫苗中存在多种抗原时，鉴别试验在检测疫苗的质量稳定性，疫苗组分的正确性过程中起到了至关重要的作用。除此之外，利用特异性免疫反应对疫苗进行鉴别试验，还可以间接证明疫苗中各有效成分是否具有相应的抗原性，疫苗制备的工艺过程是否会破坏各成分的抗原性。

鉴别试验作为判断疫苗真伪，明确疫苗组分等的有效手段，在疫苗的质量检验工作中当属首项。欧洲药典《European Pharmacopoeia 8.0》、WHO规程《WHO TechnicalReport Series》、《中华人民共和国药典》(2015年版三部)均要求对疫苗原液和成品进行鉴别。《European Pharmacopoeia 8.0》中推荐多糖疫苗如：脑膜炎球菌多糖疫苗、伤寒多糖疫苗、肺炎球菌多糖疫苗用免疫学方法和核磁共振技术进行鉴别试验，《WHO TechnicalReport Series》推荐多糖疫苗如：脑膜炎球菌多糖疫苗用免疫学方法和核磁共振技术进行鉴别试验，《中华人民共和国药典》(2015版三部)中收载的多糖疫苗制品如：伤寒Vi多糖疫苗、A群脑膜炎球菌多糖疫苗、A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗、ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗推荐鉴别方法为免疫双扩散法。该法是在琼脂板上打孔，抗原抗体加入相应孔中，待其自由扩散后，抗原抗体形成可见的沉淀线。其中抗原抗体自由扩散的速度受分子量影响，分子量小者，扩散快，反之较慢。自由扩散这一性质使得该法耗时长，且对于分子量较大的样品沉淀线不明显。

《中华人民共和国药典》(2015年版3部)中收载的多糖疫苗采用免疫学鉴别方法(免疫双扩散法)，该法具体操作是：取琼脂糖加生理盐水煮沸溶胀成1.5％溶液，趁热倾倒于水平玻板上(每平方厘米加0.19ml琼脂糖)，凝固后，在玻板上打方阵型孔(直径3mm，孔距3mm)。根据需要确定方阵型图数量。中央孔加入抗血清，周边孔加入供试品溶液，并留1孔加入相应阳性对照血清，每孔加样20μl，然后置水平湿盒中，37℃水平扩散24h。用生理氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖凝胶板，将浸泡好的琼脂糖凝胶板放入0.5％氨基黑溶液中染色。用脱色液脱至背景无色，沉淀线呈清晰蓝色为止。用适当方法保存或复制图谱。该法中抗原抗体浓度不宜过小，自由扩散过程的稀释，导致浓度太小无法产生沉淀线，样品分子量过大也不利于扩散，影响试验效果。

具体操作时，免疫双扩散法需预先制备凝胶板，将抗原抗体稀释至合适浓度，分别加入相应孔中，37℃水平扩散24h，再浸泡30min，染色30min，再经脱色液脱至背景无色，观察，整个过程耗时2天左右甚至更长，且采用自由扩散的方式使抗原抗体接触，样品分子量不宜过大，浓度不宜过低，否则均较难形成清晰的沉淀线，尤其对于在制备过程中因一系列反应使抗原性降低的样品，更难以达到免疫双扩散法中需求的适宜的抗原浓度，从而导致鉴别试验实施困难。

发明内容