[发明专利]人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法和应用

权利要求书

1.一种人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）将胎盘洗净；沿胎盘边缘剪下已脱落的蜕膜，并将羊膜分割成面积为10cm²～100cm²的组织片，然后，将胎盘胎儿面的羊膜从其附着的胎盘组织上取下：用剪刀配合镊子取下，取下的羊膜每块面积在10cm²～100cm²；

（2）清洗羊膜、蜕膜：将羊膜、蜕膜折叠或者平铺放入冻存袋或冻存管中，用生理盐水或PBS缓冲液清洗羊膜、蜕膜，加入4℃的冻存液，密封，转入程序降温仪，按照设定的降温程序降温至-80℃，转移至液氮冷冻保存；所述降温程序为：

在4℃保持5min；以2℃/min速率继续降至-10℃，保持10min；以1℃/min速率继续降至-40℃保持5min；以0.5℃/min速率继续降至-80℃保持5min；

所述冻存液，由质量浓度为20%的人血白蛋白溶液、二甲基亚砜、丙二醇、羟乙基脲和海藻糖组成，其中，各组分所占比例为：二甲基亚砜8wt%，丙二醇6wt%，羟乙基脲6wt%，海藻糖6wt%，余量为人血白蛋白溶液。

2.根据权利要求1所述的人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法，其特征在于：所述步骤（1）中，组织片的形状为四边形。

3.一种人胎盘羊膜、蜕膜的复苏方法，其特征在于：将利用权利要求1或2所述的人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法冷冻保存的胎盘羊膜或蜕膜从液氮中取出，迅速将冻存袋或冻存管置于37℃～42℃水浴锅中；溶解后迅速将冻存袋或冻存管转移至安全柜或超净台中，打开冻存袋或冻存管，用镊子轻轻取出羊膜或蜕膜，放入4℃的复苏液中，平衡3min；用4℃的生理盐水或PBS缓冲液冲洗2～5遍，放入4℃的生理盐水或PBS缓冲液中，静置；

所述复苏液，由海藻糖和羟乙基淀粉氯化钠注射液组成，其中，海藻糖占6wt%。

4.胎盘来源的组织或细胞资源样本库的建立方法，其特征在于：利用权利要求1或2所述的人胎盘羊膜、蜕膜组织的制备冻存方法处理人胎盘并储存。