[发明专利]188

说明书

本发明公开了一种¹⁸⁸Re标记的肿瘤靶向二硫键RGD环肽分子探针及其制备方法，所述¹⁸⁸Re标记的肿瘤靶向二硫键RGD环肽分子探针包括环肽RGD和放射性核素¹⁸⁸Re，放射性核素¹⁸⁸Re与环肽通过HYNIC连接。本发明¹⁸⁸Re标记的二硫键RGD环肽分子血清稳定性较预锡化法具有显著差异，荷瘤裸鼠肿瘤摄取量显著提高，SPECT显像效果较为显著。本发明用氯化亚铜预还原¹⁸⁸Re，在预还原后通过弱氧化剂作用，避免强还原剂与二硫键直接作用，维持了环肽结构的稳定性，有效避免了直接法破坏二硫键导致的肿瘤靶向生物学功能的降低，通过本发明的方法标记的二硫键RGD环肽，体内体外稳定性均较直接法高。

技术领域

本发明涉及分子影像学技术领域，特别涉及一种¹⁸⁸Re标记的肿瘤靶向二硫键RGD环肽分子探针及其制备方法。

背景技术

目前，放射性核素标记的多肽作为一类新型靶向药物已越来越多应用于肿瘤、感染、血栓等疾病的诊断和治疗中。利用受体与其配体的结合具有特异性、选择性、饱和性、亲合力强和生物效应明显等特点，将配体作为放射性核素的载体，通过配体-受体靶向介导，增加药物在病灶局部的浓度、提高增效减、靶向治疗目的，是目前研究最活跃的前沿领域之一。在该类靶向药物的研制过程中，多肽的选择、修饰是基础，而放射标记技术则是关键。

RGD肽是一类含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的短肽，作为整合素和其配体相互作用的识别位点，介导细胞与细胞外基质及细胞之间的相互作用。整合素αvβ3在多种肿瘤细胞表面和新生血管内皮细胞上有高表达，但在成熟血管内皮细胞和绝大多数正常器官系统中αvβ3不表达或者很少量的表达。0αvβ3能以一定的亲和力结合RGD肽，因此，可以设计含有RGD序列的肽，并用放射性核素¹²⁵I、¹⁸F等标记，作为一种特异性强、敏感性高的肿瘤受体显像剂。

铼188在杀死癌细胞时能够同步释放出伽玛射线，可透过电脑断层扫描追踪诊断治疗效果，兼具治疗与诊断两种功效。目前国内外¹⁸⁸Re常规标记手段主要包括直接法和间接法。

直接标记法较多应用于大分子蛋白质注入抗体及其片段的标记，标记过程相对简单，在大多数情况下，¹⁸⁸Re通过降解多肽分子内的二硫键后与自由巯基结合。然而，直接标记法的标记过程难以控制，也难以了解标记时多肽参与反应的原子数量和放射性核素络合的几何形状，并且，这种标记方式大多使用氯化亚锡还原(预锡化法)，标记过程中会打开多肽的二硫键，易导致多肽结构发生变化，造成蛋白活性的损伤，使其靶向肿瘤的生物活性的减弱。对于不含二硫键的多肽直接标记法并不适用，即使对含二硫键的多肽，环状结构的微小改变对其生物活性也会产生巨大影响。

间接标记法是目前普遍采用的方法，即多肽通过双功能螯合剂(bifunctionalchelating agent，BFCA)间接地与放射性的金属离子形成稳定的复合物。由间接标记法制备的多肽放射性药物通常包括三个必需的部分：多肽、放射性核素和 BFCA。多肽作为靶向载体，携带发射特征性射线的放射性核素到达体内的靶组织，使之发挥示踪和治疗作用。BFCA既能与多肽的非活性序列端共价结合，又能与金属离子形成稳定的络合物。为了尽可能地减少多肽与BFCA中间的相互影响，人们在二者之间引入了连接集团(linker)或间隔集团(spacer)，连接基团可以是长的聚乙二醇或烃链，也可以是多聚氨基酸如gly-gly-gly、cys-gly-cys、 gly-gly-cys等。这样，既减轻了标记对于多肽的生物活性的影响，又降低了对 BFCA的配位基团的要求，有助于BFCA和放射性核素的选择。

目前常见的二硫键成环靶向的多肽的标记常用为直接法，而一些用间接法标记则由于方法不当，双功能螯合接头及二硫键能竞争性结合¹⁸⁸Re，均造成多肽的生物活性的降低。

发明内容