[发明专利]一种血液游离DNA的保护剂及真空采血管

说明书

本发明公开了一种血液游离DNA的保护剂及真空采血管。本发明血液游离DNA的保护剂为一种组合物，该组合物包括咪唑烷基脲、乙二胺四乙酸三钾二水合物和甘氨酸。本发明用于血液中游离DNA检测的真空采血管，它包括采血管和与之相匹配的塞子，所述采血管呈真空状态；所述采血管内设有所述的血液游离DNA的保护剂。本发明保护剂能够有效防止细胞中基因组DNA释放到血浆中，保护血浆中游离DNA不被污染；能够在常温条件下使血液中游离DNA稳定储存一周。

技术领域

本发明涉及一种血液游离DNA的保护剂及真空采血管，属于生物检测技术领域。

背景技术

随着二代基因测序技术的快速发展，对于血液中游离DNA的早期筛查已经成为一种重要的检测手段，它可以用于基于基因检测技术的癌症的早期筛查、诊断、监控等领域，也可用于无创伤性产前诊断。虽然健康人体的血浆中只有少量游离DNA，但血液循环中的游离DNA水平的增减与许多临床疾病有关。无创产前诊断是通过对产妇血液中的胎儿游离DNA的检测分析，判断胎儿是否存在整个染色体或者大片段DNA变异等，进而对胎儿遗传疾病做出诊断。但是，孕妇血浆中胎儿游离DNA的含量很少，仅占总游离DNA的5％～7％，血样采集、保存、血浆分离方法不当都会导致母体有核细胞破裂释放出的染色体DNA污染和细胞内高浓度的DNA酶降解，影响分析结果的准确性。

随着液体活检的兴起，众所周知，癌症越早发现越容易治愈，因此液体活检在临床诊断中有着重要的意义。肿瘤细胞在进行分裂增值过程当中，会凋亡、死亡，也会主动向血液中分泌这种已经经历过基因突变的DNA碎片，并且有研究发现血浆DNA与肿瘤细胞DNA具有一致性，这也成为了肿瘤早期诊断中重要的Biomarker。因此如何保存血液，使其最大程度的保持初始状态也成为了人们关注的焦点。

目前市场上已有众多品牌的血液保存管，其主要成分是EDTA或者肝素锂或肝素钠，其主要作用是收集全血，进行血浆分离。仅含有抗凝剂的采血管，对储存和运输条件的要求苛刻，血液样本不易保存，且保存时间有限，不利于边远地区进行采样并且也不能有效抑制RNase酶的活性，从而不能保护血浆中游离DNA的稳定性，导致肿瘤早期筛查或者胎儿的产前筛查和诊断的结果不准确。

发明内容

本发明的目的是提供一种血液游离DNA的保护剂及真空采血管，本发明保护剂能够有效防止细胞中基因组DNA释放到血浆中，保护血浆中游离DNA不被污染；能够在常温条件下使血液中游离DNA稳定储存一周。

本发明提供的一种组合物，它包括防腐剂、乙二胺四乙酸盐和缓冲溶剂；

所述防腐剂选自咪唑烷基脲、双(羟甲基)咪唑烷基脲和重氮咪唑烷基脲中的至少一种；

所述乙二胺四乙酸盐选自乙二胺四乙酸三钾二水合物和/或二水合乙二胺四乙酸二钠；

所述缓冲溶剂选自甘氨酸、Tris-HCl和氯化钠中的至少一种。

本发明所述组合物具体可由所述咪唑烷基脲、所述乙二胺四乙酸三钾二水合物和所述甘氨酸组成。

上述的组合物中，所述防腐剂、所述乙二胺四乙酸盐和所述缓冲溶剂的质量比可为1～9.27：1：0.29～1。

上述的组合物中，所述防腐剂、所述乙二胺四乙酸盐和所述缓冲溶剂的质量比可为4.94～6.17：1：0.46～0.58，具体可为5.20:1:0.48、5.53:1:0.52、5.86:1:0.55、6.17：1：0.58。

本发明中，所述咪唑烷基脲英文名称为Imidazolidinyl urea，简称IDU，起到防腐剂的作用；在本发明保护剂中起到维持细胞稳定，防止细胞破裂释放DNA，从而避免细胞外游离DNA浓度的增加；