[发明专利]一种基于DNA适体的胚胎干细胞分离和表面固定胚胎干细胞的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及一种基于DNA适体的分离胚胎干细胞和表面固定胚胎干细胞的方法。所述DNA适体与胚胎干细胞具有很强的结合特性和稳定性。该适体的获得是应用SELEX技术和流式细胞法的结合，以胚胎干细胞为靶目标，从随机文库中筛选出能与其特异性结合的DNA适体。该适体通过体外合成，无批间差异、合成成本低，与胚胎干细胞的结合具有高亲和力和选择性，无免疫原性或毒性作用，具有极大的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种基于DNA适体的胚胎干细胞分离和表面固定胚胎干细胞的方法。

背景技术

胚胎干细胞(Embryonic stem cells，ESCs)是一种从早期胚胎的囊胚内细胞团细胞或胎儿原始生殖细胞(primordial germ cells，PGCs)中经分离、体外抑制分化培养得到的具有发育全能性(或多能性)的一类干细胞。与已经成熟分化的体细胞一样，胚胎干细胞细胞也是一分为二地分裂增殖，且胚胎干细胞具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。在一定的培养条件下，胚胎干细胞可以在体外长久和稳定地自我复制，实现“永生”。无论在体外还是体内环境，胚胎干细胞都能被诱导分化为内、中、外3个胚层的几乎所有类型细胞。因此，胚胎干细胞成为研究哺乳动物早期胚胎发生、细胞组织分化、基因表达调控等发育生物学基础研究的一个非常理想的模型系统和非常有用的工具，也是进行动物胚胎工程开发和用于治疗各种疾病，修复受损伤的组织和器官的一个重要途径，具有广泛的应用。

治疗应用和组织工程应用迫切需要一种快速有效的方法从胚胎直接分离胚胎干细胞。且目前的传统胚胎干细胞分离方法分离对象主要是针对动物，如猪、小鼠、鸡等。因此，探索一种有效的从人胚胎直接分离胚胎干细胞的方法具有潜在的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离胚胎干细胞的适体。

本发明的进一步目的在于提供一种特异性高的分离胚胎干细胞的适体。

本发明的进一步目的在于提供一种稳定性高的分离胚胎干细胞的适体。

本发明另一个目的在于提供一种基于DNA适体分离胚胎干细胞的方法。

本发明另一个目的在于提供一种基于DNA适体的胚胎干细胞分离和表面固定胚胎干细胞的方法。

本发明另一个目的在于提供一种筛选适体的方法。

为解决以上技术问题，本发明设计了一种适体。

适体是单链DNA(ssDNA)或RNA分子，可折叠成三维结构以结合多种靶标，包括蛋白质，肽，酶，抗体和各种细胞表面受体。适体的长度可达100个碱基，可通过指数富集(SELEX)系统进化配体的体外选择过程从组合文库中产生。与其他靶向剂相比，适体具有显著的优势。它们以高亲和力和选择性与其靶标结合，没有免疫原性或毒性作用，并显示出快速的循环清除率。而且，它们可以在体外很容易合成。适体用于诊断和治疗领域，作为特异性抑制剂或作为生物传感器来检测预期目标。

适体可以筛选多种来源的间充质干细胞，以及造血干细胞，但是还没有关于分离人胚胎干细胞的报道。本领域公知，不同类型的细胞，其细胞性质不同，尤其是细胞表面受体不同，每种细胞均有其特异性的表面受体，因此，适用于一种类型细胞筛选的适体，一般情况下并不能用于另外一个细胞的筛选。胚胎干细胞能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型(全能性)，即可以分化成成体干细胞，如间充质干细胞或者造血干细胞。而成体没有胚胎干细胞的全能性。这也反应了胚胎干细胞区别于一般的成体干细胞，适用于成体干细胞的适体不一定能够适应本发明中的胚胎干细胞。

通过大量的研究，本发明找到了一种可以特异性筛选胚胎干细胞的适体。

一方面，本发明提供了一种特异性结合胚胎干细胞的适体片段序列。其中，所述适体片段序列为DNA适体片段序列SEQ ID NO：5TAGGAGGAGGTATTTAGTGCCAAGCCTTCTCAAACGACGT。