[发明专利]新型肿瘤组织保存液及其应用

说明书

本发明涉及生物技术，尤其是公开了一种新型肿瘤组织保存液及其应用，包含RPMI1640培养基、人血清、小鼠血清。本发明能够保持从人体取出的活体肿瘤组织的生物活性，提高肿瘤组织移植到小鼠体内成功率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种新型肿瘤组织保存液及其应用。

背景技术

人源肿瘤移植瘤(Patient-Derived Xenograft,PDX)模型，是把患者的新鲜肿瘤组织(穿刺样本或者手术样本)直接移植到免疫缺陷小鼠体内，从而生长出来的肿瘤模型。PDX模型与传统的细胞系模型相比更能反映患者肿瘤的生物学特征，PDX模型不仅保留了与患者肿瘤组织相似的增殖和组织病理学特征，而且在生物学行为上，包括肿瘤的基因，蛋白质等分子特征与患者肿瘤组织具有高度的一致性。

PDX模型的构建需要新鲜的人活体肿瘤组织样本，因此为确保移植的成功率，在肿瘤组织移植过程中，需要用保存液来维持运输过程中营养供给，保持肿瘤组织的生物活性。

目前常见的肿瘤组织体外保存液为磷酸盐缓冲液、基础培养基以及在现有基础培养基中添加胎牛血清等。其中，磷酸盐缓冲液的主要成分包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠和氯化钾等，具有盐平衡，有助于保持组织恒定的pH值，稳定的渗透压和离子浓度；基础培养基的主要成分包括碳酸氢钠缓冲系统，还原剂谷胱甘肽和高浓度的维生素，适用于培养各种哺乳动物细胞，可用来维持细胞活性；而胎牛血清的主要成分是包括蛋白质、多肽、生长因子、激素等组成的混合物，含有丰富的细胞生长必须的营养成分，对细胞的体外培养具有重要作用。

在长期的实验和研发过程中发现，PBS缓冲液成分简单，功能局限，不能很好地保持体外肿瘤组织的生物活性；基础培养基不含蛋白质、脂质或生长因子，不能作为肿瘤组织体外保存的最佳选择。目前已有的一些方法，在缓冲液及基础培养基中添加胎牛血清，营造一个生物微环境，增加体外肿瘤细胞生长所需的营养成分，维持细胞的活力。

现有的提高肿瘤组织在体外活性的方法，大多都是在缓冲液或基础培养基中添加胎牛血清，但是牛源血清与人源肿瘤组织和鼠源受体均不一致，该差异可能会影响肿瘤组织移植到小鼠体内的生长。本方法对现有技术的不足做了调整及优化，充分考虑到异种移植人体内环境与小鼠环境的差异，用人血清-小鼠血清混合物替代牛源血清，在维持肿瘤生长的前提下，让肿瘤组织提前适应小鼠体内新环境。

发明内容

本发明为了克服现有技术的不足，提供一种保持从人体取出的活体肿瘤组织的生物活性，提高肿瘤组织移植到小鼠体内成功率的新型肿瘤组织保存液及其应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种新型肿瘤组织保存液，包含RPMI1640培养基、人血清、小鼠血清。本发明是在肿瘤组织运输过程中，保存液中添加人血清-小鼠血清混合物，血清中含有多种蛋白、多肽、生长因子等保持肿瘤组织的生物活性，给肿瘤组织营造一个蛋白保护的微环境，主要让离体的人肿瘤组织从全人环境到运输过程中的人-鼠过渡环境以及最终移植到小鼠体内时的鼠体环境有一个缓慢适应的过程，从而提高肿瘤组织移植的成功率。

进一步地，所述RPMI1640培养基70％，人血清15％、小鼠血清15％。

另外，本发明还提供了一种所述的新型肿瘤组织保存液在人活体肿瘤组织移植到免疫缺陷小鼠上的应用。

加入小鼠血清是为了给离体的人组织提供一个类似体内的环境，提前适应小鼠体内微环境，此外小鼠血清中也包含了小鼠激素和生长因子,可以维持细胞生物学活性以保护细胞。主要作用有：

1、提供基本营养物质或基础培养基所缺乏的营养物质：如氨基酸、无机物、脂类物质、核酸衍生物等；

2、提供有利于细胞生长增殖所需的激素、生长因子；