[发明专利]一种利用紧穗野生稻叶鞘为外植体获得再生植株的方法

权利要求书

1.一种利用紧穗野生稻叶鞘为外植体获得再生植株的方法，其特征在于包括前处理、预培养、诱导培养、继代培养、增殖培养、分化培养、壮苗培养、生根培养和炼苗移栽步骤，具体包括：

A、前处理：选择无病害的新鲜幼嫩植株，清洗后切下叶鞘，叶鞘灭菌后备用；

B、预培养：将前处理后的叶鞘切成小段，接种于预培养基中，于温度25~30℃下暗培养2~4天得到预培养叶鞘；

C、诱导培养：将预培养叶鞘取出接入诱导培养基上，于温度25~30℃下暗培养25~35天得到诱导愈伤组织；

D、继代培养：将诱导愈伤组织接入继代培养基中，于温度25~30℃下暗培养35~40天至诱导愈伤组织长至0.4~0.6cm，且诱导愈伤组织由白色变成淡黄色紧实颗粒得到继代愈伤组织；

E、增殖培养：将继代愈伤组织接入增殖培养基中，于温度25~30℃、光照为1500~2500Lx下进行弱光培养35~40天得到增殖愈伤组织；

F、分化培养：将增殖愈伤组织接入分化培养基中，于温度25~30℃、光照为3500~4500Lx下进行光照培养40~60天得到小苗；

G、壮苗培养：将小苗接入壮苗培养基中，于温度25~30℃、光照为3500~4500Lx下进行光照培养25~30天得到健壮无根苗；

H、生根培养：将健壮无根苗接入生根培养基中，于温度25~30℃、光照为1500~2500Lx下进行弱光培养20~25天得到生根苗；

I、炼苗移栽：将生根苗的根部培养基冲洗干净，加水淹没根部，于温度25~30℃、光照为1500~2500Lx下过渡培养4~6天，然后移栽到市购营养基质中于温度25~30℃、光照为1500~2500Lx下培养10 ~15天直至叶片展开、新根长出，然后移栽至大田中；

其中，所述的预培养基为：N₆基本培养基 + 植物凝胶2.5~3.0g/L+蔗糖30%， pH5.8~6.0；

所述的诱导培养基为：N₆基本培养基 + 2,4-D 4.0~6.0mg/L + 植物凝胶2.5~3.0g/L+蔗糖30% ，pH5.8~6.0；

所述的继代培养基为：N₆基本培养基 + 2,4-D 3.0~5.0mg/L + 植物凝胶2.5~3.0g/L+蔗糖30%，pH5.8~6.0；

所述的增殖培养基为：N₆基本培养基 + 2,4-D 5.0~7.0mg/L + 植物凝胶2.5~3.0g/L+蔗糖30%， pH5.8~6.0；

所述的分化培养基为：N₆基本培养基 + 6-BA 6mg/L+ NAA 0.4~0.6mg/L+K T 1~3mg/L+植物凝胶2.5~3.0g/L+蔗糖30%，pH5.8~6.0；

所述的壮苗培养基为：N₆基本培养基 + 6-BA 1~3mg/L+ IAA 0.3~0.5mg/L+TDZ 3~5mg/L+植物凝胶2.5~3.0g/L+蔗糖30%，pH5.8~6.0；

所述的生根培养基为：N₆基本培养基 + IAA 0.2~0.4mg/L+TDZ 0.5~1.5mg/L+植物凝胶2.5~3.0g/L+蔗糖30%，pH5.8~6.0。

2.根据权利要求1所述的利用紧穗野生稻叶鞘为外植体获得再生植株的方法，其特征在于A步骤中所述的清洗是将幼嫩植株用自来水冲洗8~12min，再用蒸馏水冲洗1~3次。

3.根据权利要求1所述的利用紧穗野生稻叶鞘为外植体获得再生植株的方法，其特征在于A步骤中所述的灭菌是用体积百分浓度75%的酒精表面灭菌0.5~1.5min，无菌水冲洗2~4次，再加入体积百分浓度0.1%的氯化汞处理6~10min，倒掉氯化汞，再加入体积百分浓度0.1%的氯化汞处理4~6min，用无菌水冲洗4~6次，用无菌吸水纸吸干表面水分。

4.根据权利要求1所述的利用紧穗野生稻叶鞘为外植体获得再生植株的方法，其特征在于所述的预培养基为：N₆基本培养基 + 植物凝胶2.8g/L+蔗糖30%， pH6.0。