[发明专利]鸡安卡拉病毒Hexon蛋白间接ELISA检测方法在审

专利信息
申请号: 201810793339.X 申请日: 2018-07-18
公开(公告)号: CN108872577A 公开(公告)日: 2018-11-23
发明(设计)人: 李佩国;吴同磊;李蕴玉;常超越;张香斋;贾青辉 申请(专利权)人: 河北科技师范学院
主分类号: G01N33/569 分类号: G01N33/569;G01N33/558
代理公司: 长沙星耀专利事务所(普通合伙) 43205 代理人: 许伯严
地址: 066600 河北省秦*** 国省代码: 河北;13
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摘要:
搜索关键词: 包被 间接ELISA检测 最佳稀释度 阳性血清 稀释度 抗原 病毒 血清稀释度 重复性检测 包被抗原 底物显色 酶标二抗 阴性血清 重组蛋白 血清 避光 二抗 显色 一抗 蛋白 采集 保存
【权利要求书】:

1.一种采用间接ELISA方法检测鸡安卡拉病毒的方法,其特征在于:采用纯化的GST-hexon重组蛋白作为包被抗原,以兔抗鸡酶标作为二抗,进行的安卡拉阳性血清的间接ELISA方法检测。

2.如权利要求1所述的一种采用间接ELISA方法检测鸡安卡拉病毒的方法,其特征在于,所述抗原的最佳的包被浓度为0.125µg/mL,血清稀释度为1:400,包被条件为37℃ 1h,4℃过夜,二抗稀释度为1:4000,底物显色时间为10min。

3.如权利要求1所述的一种采用间接ELISA方法检测鸡安卡拉病毒的方法,其特征在于,所述ELISA的临界值为0.084。

4.如权利要求1所述的一种采用间接ELISA方法检测鸡安卡拉病毒的方法,其特征在于,所述GST-hexon重组蛋白的制备方法为:选择Hexon结构蛋白基因设计引物,以尿囊液为模板进行PCR,将回收PCR产物和表达载体质粒pGEX6P-1同时用BamHⅠ和SalⅠ分别进行双酶切,琼脂糖凝胶回收hexon片段和质粒,用T4连接酶进行连接,构建重组表达载体pGEX-6P-1-GST-hexon,转化大肠杆菌感受态DH5α,检测阳性质粒转入感受态细胞BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析,该蛋白以包涵体形式表达。

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