[发明专利]一种用抗体针对无识别标记蛋白或细胞裂解物的DNA编码化合物筛选方法

说明书

本发明公开了一种用抗体针对无识别标记蛋白或细胞裂解物的DNA编码化合物筛选方法，包括如下步骤：(1)将抗体包被到免疫磁珠蛋白G上；(2)将含有靶点蛋白的溶液加入已结合抗体的磁珠上，洗去没有与抗体结合的物质；(3)加入DNA编码化合物库进行筛选；(4)将没有结合的化合物清洗去除；(5)用加热的方法将有结合的化合物提取出；(6)用二代测序来解码化合物结构，并进行合成和后续功能验证。本发明避免了提纯蛋白的繁琐流程，同时解决了纯化的蛋白不含翻译后修饰的问题，能有效提高筛选效率，降低筛选成本。

技术领域

本发明属于药物筛选领域，具体涉及DNA编码化合物筛选的方法，尤其涉及一种用抗体针对无识别标记蛋白或细胞裂解物的DNA编码化合物筛选方法。

背景技术

DNA编码化合物库作为一种新型的小分子药物筛选方法，能极大地提高药物筛选的通量和速度，减少人力和物力成本，提高筛选效率。现有方法常用的是将带识别标记(tag)的纯化的靶点蛋白固定在固相载体上进行化合物筛选，因而需要靶点蛋白的合成和纯化过程，流程繁琐，耗时长，成本高，并且纯化的蛋白较难拥有生理条件下的翻译后修饰，从而难以保持原有的蛋白结构和生物活性，得到有效化合物的成功率降低。同时，对于无tag的蛋白或纯化后生物活性改变的蛋白，难以用该方法进行筛选。

中国发明专利申请CN201610871861.6公开了一种DNA编码分子库及化合物筛选方法，该发明利用光能使与蛋白质结合的化合物与其结合靶点发生交联反应，以保护有结合的化合物。同时通过DNA外切酶将没有结合的DNA编码化合物降解。最后再通过测序解码找出与靶点蛋白有相互作用的化合物结构。此方法可用于无标记的靶点蛋白的DNA编码化合物库筛选。此方法的局限性在于：此方法虽然可以用于无标记的蛋白，但是在用于细胞或组织裂解液时，因为其中有大量杂质，会导致背景噪音过高，不利于得出有效数据。

因此，亟需研发另一种适用于无标记或者细胞裂解物(lysate)进行DNA编码化合物库筛选的方法，以克服上述缺陷。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种针对无识别标记(tag)蛋白或细胞裂解物(lysate)的DNA编码化合物筛选方法，避免了提纯蛋白的繁琐流程，同时解决了纯化的蛋白不含翻译后修饰的问题，能有效提高筛选效率，降低筛选成本。本发明利用抗体本身特异性高的特点,能有效地降低背景噪音的干扰,提高筛选的成功率。

为解决现有技术存在的问题，本方法利用抗体将靶点蛋白固定，可适用于无tag或者细胞lysate进行DNA编码化合物库的筛选。

本发明采用的技术方案是：

一种用抗体针对无识别标记蛋白或细胞裂解物的DNA编码化合物筛选方法，包括如下步骤：

(1)将抗体包被到免疫磁珠蛋白G(Dynabeads protein G)上；

(2)将含有靶点蛋白的溶液加入已结合抗体的磁珠(beads)上，洗去没有与抗体结合的物质；

(3)加入DNA编码化合物库进行筛选；

(4)将没有结合的化合物清洗去除；

(5)用加热的方法将有结合的化合物提取出；

(6)用二代测序来解码化合物结构，并进行合成和后续功能验证。

作为本发明优选的技术方案，在步骤(1)之前增加如下步骤：用磁力架将一定量涡旋振荡混匀的免疫磁珠(Dynabeads)固定，除去上层液体；将磁珠与磁力架分离；用抗体结合缓冲液(Antibody binding buffer)清洗磁珠一次。所述抗体结合缓冲液的成分为:10mMDPBS(杜氏磷酸盐缓冲液)，0.02％Tween20(吐温-20)。