[发明专利]高亲和力的PD1胞外区突变体多肽及相关融合蛋白

说明书

本发明涉及一组一种高亲和力的PD1胞外区突变体多肽及相关的融合蛋白，所述的突变体在如Seq ID No.23所示的野生型PD1分子胞外区多肽序列的基础上，包含至少一个的如下突变位点：E13G、A17V、A17D、S29G、L32M、N33S、L46M、L46V、R52G、S54T、Q66H、S76P、W83S、L89P、A99V、K102E、I110V、E117G。所述的融合蛋白为所述多肽与人IgG1的Fc区融合而成的融合蛋白。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体而言，涉及一种高亲和力的PD1胞外区突变体多肽及相关融合蛋白。

背景技术

PD1(程序性死亡因子受体1，Programmed Death-1)是在激活的T细胞和B细胞上表达的免疫抑制性受体，其配体为PDL-1或PDL-2。PD-1属于B7家族，是大小为50-55kD的Ig超家族Ⅰ型跨膜糖蛋白；由胞外IgV区、跨膜区、胞内区三部分组成，通过结构和生化分析发现，由于缺少膜近端半胱氨酸残基，PD-1以单体存在(Xuewu Zhang and Almo,Immunity,2004,20,337–347)。PD1与配体PDL1相互作用，在免疫应答的负调控方面发挥着重要作用。许多肿瘤细胞系和肿瘤细胞高表达PDL1分子(Konishi J et al.,Clin.Cancer Res.,2004，10(15):5094－5100)，其与淋巴细胞表面的PD1分子结合后，削弱了机体的抗肿瘤免疫应答(Radziewicz H et al.,J Virol，2007,81(6):2545－2553)，从而导致肿瘤免疫逃逸的发生。

已有的PD1抗体的治疗效果，和肿瘤细胞表面具有功能活性PDL1分子的量存在一定的关系，但并无有效定量PDL1分子的制剂存在，虽然PDL1抗体能够特异性的结合PDL1分子，但抗体的抗原表位有可能并非PDL1与PD1结合的关键结构域，因此，使用PDL1抗体对PDL1分子进行定量，可能受到无活性的PDL1的干扰，因此，临床上需要更有效的用于定量PDL1分子的产品。

另外，PD1抗体分子量较大，大分子对于实体性肿瘤的治疗效果往往不佳，因此，获得分子量更小且同样具有与PD1抗体类似的竞争性结合PDL1配体并介导免疫反应的分子，也是具有极大的临床应用前景。

在天然状态下，PD1与其配体PDL1的结合亲和力不高，因此，可以通过基因工程的方法，优化PD1分子胞外区与PDL1分子的亲和力，从而解决上述问题。

发明内容

本发明首先涉及一组人PD1分子胞外区突变体多肽，所述的突变体多肽在如SeqID No.23所示的野生型PD1分子胞外区多肽序列的基础上，包含至少一个的如下突变位点：E13G、A17V、A17D、S29G、L32M、N33S、L46M、L46V、R52G、S54T、Q66H、S76P、W83S、L89P、A99V、K102E、I110V、E117G。

优选的，所述的突变体多肽具体为，在如Seq ID No.23所示的野生型PD1分子胞外区多肽序列的基础上，包含如下表所示具体突变位点的21个突变体：

更优选的，所述的PD1胞外区的突变体多肽是在如Seq ID No.23所示的野生型PD1分子胞外区多肽序列的基础上，包含至少一个的如下突变位点：K102E、A99V。

本发明还涉及一种包含所述PD1胞外区的突变体多肽的融合蛋白。

优选的，所述的融合蛋白包含如下结构域：

(1)所述的PD1胞外区的突变体多肽

(2)人免疫球蛋白或其片段；

以及，可选的：

(3)其他功能性多肽片段，所述的功能性多肽片段可选自：细胞毒多肽、细胞激素、免疫检查点配体/受体、白介素等。