[发明专利]一种口蹄疫病毒抗体评价试纸条

说明书

本发明公开了一种口蹄疫病毒抗体评价试纸条，该试纸条的检测线是利用口蹄疫病毒VP1表位多肽人工抗原印制而成，所选用的多肽为口蹄疫病毒VP1表位多肽(第142～158位氨基酸序列)。本发明制备的人工抗原具有容易获得，结构稳定，纯度可达99％，成本低，可快速大量生产等优点，这种人工抗原的使用解决了传统表达蛋白表达量低，难以保证天然的空间结构，复性困难，难以除去菌体蛋白，影响检测结果的特异性等缺点，也解决了使用灭活病毒存在病毒灭活不全的风险。本发明还对金标垫进行预处理，更有利于金标垫吸水及金标蛋白的释放，有效解决现有试纸存在的金标蛋白释放慢且不完全，影响试纸产品检测准确性、灵敏度及保质期等问题。

技术领域

本发明涉及一种口蹄疫病毒抗体评价试纸条，属于免疫检测技术领域。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种烈性传染性疫病病。口蹄疫病毒具有多型性、易变性、宿主广泛性、传染力极强性，所以一旦发病即呈流行性、大爆发性。更为严重的是，口蹄疫是一种烈性传染病，据有极强的传染性，对于发病动物以及接触病原的同群动物，必需进行严格隔离、封锁、禁止动物移动和畜产品上市等，因此，导致发病地区甚至发病国家的畜产品进出口贸易停止，造成巨大的经济损失。

发展中国家控制口蹄疫的主要策略是疫苗免疫，口蹄疫免疫动物群体疫苗免疫动物免疫效果、母源抗体以及免疫程序的制定都需要依赖抗体检测。目前口蹄疫病毒抗体水平检测的血清学方法主要是液相阻断ELISA(Liquid phase blocking ELISA，LPBE)以及抗体检测试纸条。这些方法所用的抗原主要是灭活病毒或者表达蛋白，灭活病毒存在病毒灭活不全、纯化困难的问题；表达蛋白存在这蛋白表达量低、菌体蛋白难以除去等问题。抗体检测试纸条具有快速、简便、成本低廉的优势，金标垫是试纸的重要组成部分，它决定了金标蛋白的活性和释放性，因此对胶体金免疫层析试纸的效果影响很大。目前，金标垫的制备方法为在纤维棉上直接喷涂或浸泡胶体金标记的蛋白/抗体，或将纤维棉采用处理液浸泡处理后，再喷涂或浸泡胶体金标记的蛋白。但在使用过程中发现，因金标垫处理方法及处理液配方不合适，往往存在金标蛋白释放慢且不完全、从而影响试纸产品检测准确性、灵敏度及保质期等问题。

发明内容

为了克服现有技术中表达蛋白表达量低，难以保证天然的空间结构，复性困难，菌体蛋白影响检测结果的特异性以及灭活病毒存在病毒灭活不全的风险等缺点，以及现有试纸存在的金标蛋白释放慢且不完全，影响试纸产品检测准确性、灵敏度及保质期等问题，本发明结合现有口蹄疫检测ELISA方法和试纸条的优缺点，利用多肽表位制备的人工抗原及金标垫处理方法，发明一种新型的口蹄疫病毒抗体评价试纸条。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种口蹄疫病毒抗体评价试纸条，试纸条的检测线是利用口蹄疫病毒VP1表位多肽人工抗原印制而成，VP1表位多肽人工抗原为人工合成口蹄疫病毒VP1表位多肽，并偶联载体蛋白形成的人工抗原。

口蹄疫病毒VP1表位多肽为口蹄疫病毒VP1上第142～158位氨基酸序列，并在其-NH₄端加入一个半胱氨酸。

口蹄疫病毒为口蹄疫病毒O/GX/09-7毒株、口蹄疫病毒O/HN/CHA/93毒株、口蹄疫病毒O/TAW/97毒株、口蹄疫病毒O/MYA/98毒株中至少一种。

口蹄疫病毒O/GX/09-7毒株VP1上第142～158位氨基酸序列为NNVRGDLQVLAQKAERA；口蹄疫病毒O/HN/CHA/93毒株VP1上第142～158位氨基酸序列为SNVRGDLQVLAQKAERA；口蹄疫病毒O/TAW/97毒株VP1上第142～158位氨基酸序列为NNVRGDLQVLAQKAERT；口蹄疫病毒O/MYA/98毒株VP1上第142～158位氨基酸序列为TNVRGDLQVLAQKAARP。

口蹄疫病毒抗体评价试纸条，还包括利用抗待检动物物种的二抗IgG印制的对照线。